孕妇B族链球菌感染荧光PCR检测技术的建立及应用.pdfVIP

孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 中文摘要 I 中文摘要 孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 II 孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 中文摘要 III 中文摘要 孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 IV 孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 中文摘要 孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 中文摘要 【背景】 B 族链球菌（Group B Streptococcus，GBS ）为革兰氏阳性球菌，是围产期和新 生儿感染疾病的首要致病菌。GBS 按其型的特异性可分为至少10 个血清型，任何血 清型都能引起早发型GBS 感染。已有研究发现，GBS 还可引起尿路感染、羊膜炎、 产后子宫内膜炎、伤口感染、产时和/或产后菌血症以及死产，生殖道GBS 菌落可引 起胎膜早破或早产，GBS 也已成为新生儿出生后 2 个月内菌血症和脑膜炎的最常见 致病菌。 目前的GBS 检测方法有：病原分离、革兰氏染色、免疫荧光抗体检测、血清淀 粉培养基比色法，检测抗原的多种方法如同协同凝集试验、乳胶凝集试验和酶联免疫 吸附试验、以及DNA 探针，但血清学方法多存在耗时、耗力、准确率低等缺点，而 新发展的快速检测分子生物学的常规方法在某些方面可以弥补血清学的不足，但是环 境污染、重复性不高、灵敏度不足、假阳性等限制了推广应用。 【目的】 建立合理检测方法，快速检测孕妇感染的B 族链球菌。 【研究方法】 本研究采用了实时荧光PCR 扩增特异性DNA 靶片断，使用荧光标记的杂交探针 进行检测并实时监测扩增产物。通过对 GBS 引物探针的验证、最低检出险、线性范 围、准确性、特异性、干扰物质、重复性等进行评价，采用荧光PCR 法与序列分析 法同时对样本进行检测，综合各种检测方法检测结果，对荧光 PCR 法试剂进行灵敏 度、特异性、总符合率、Kappa 值一致性评价及 Kappa 值的假设检验（U ），评价临 床考核试验的真实性及可靠性。 【结果】 4 结果显示：本反应体系的灵敏度确定为 1×10 CFU/ml ，线性范围为 8 3 1×10 copies/ml—2×10 copies/ml，准确率为 100%,特异性良好、不存在干扰，精密度 V 中文摘要 孕妇B 族链球菌感染荧光PCR 检测技术的建立和应用 参考品变异系数CV 均小于5%，重复性符合要求。用建立的方法检测苏州大学附属 第一医院200 份样本，37 份阳性全部检出，163 阴性全部为阴性。 【结论】 通过性能评价试验和临床样本验证，本研究建立的实时定量荧光 PCR 方法是 一种特异性强、灵敏度高，重复性好，快速安全的检测方法，可以用于GBS 的快 速检测。 关键词：B 族链球菌 ;