流式细胞术在临床、科研中及应用.ppt

蒋XX 淋巴结 （右肺癌伴颈部淋巴结，肝内转移,可能为大细胞神经内分泌癌或分化差癌伴神经内分泌分化） 王XX 腹水 （ 妇科腹膜间皮瘤） 手术切除的乳腺肿块 DNA细胞周期分析临床意义 DNA诊断肿瘤 DNA非整倍体细胞峰或突出的四倍体细胞峰 S期细胞含量10-15% DNA非整倍体的出现可能是癌前病变发生早期癌变的一个重要标志 在淋巴瘤病理形态学不能做出诊断前可提供确切诊断信息 DNA非整倍体的交界瘤应按恶性对待 形态学表现良性的肿瘤出现非整倍体提示恶变可能 DNA指数可作为判断间叶组织肿瘤良恶性的辅助指标 DNA细胞周期分析临床意义 DNA及倍体分析在某些肿瘤有预后价值： 膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、皮肤黑色素瘤 非整倍体的肿瘤恶性程度高，复发率高，转移率预后差。 近二倍体和二倍体肿瘤预后好，少数肿瘤的DNA分析对预后无判断价值。高S期肿瘤一般比低S期对化疗敏感。 S期比率与肿瘤组织学分级密切相关： 肺癌、乳腺癌、Hodgkin、卵巢癌、直肠癌、甲状腺癌、睾丸癌、脑型星形细胞瘤 DNA细胞周期分析临床意义 监测病情与药效： 流式细胞术可精确检测药物对肿瘤细胞的作用，研究肿瘤化疗药物的选择，制定合理的化疗方案，并随时监测病情发展和治疗效果，判断临床治疗方法的疗效或用于探讨新药新方法的作用机理和疗效。 脱落细胞DNA分析: 细胞抽吸物、体液、组织液、灌洗液脱落细胞的DNA分析。 肿瘤细胞SPF(S期含量) 肿瘤细胞(单克隆) (14.18%) 正常骨髓细胞 (2.93%) 肿瘤细胞(多克隆) (28.52%) 免疫功能检测 淋巴细胞亚群分析 淋巴细胞 T淋巴细胞（CD3+）↓ 细胞免疫 辅助性Th细胞(CD3+CD4+) ↓ 抑制T\细胞毒T(CD3+CD8+) ↑ B淋巴细胞（CD19+） 体液免疫 　 NK细胞（CD3-CD16+56+） ↓ 能杀伤某些肿瘤细胞、已经被病毒感染的机体细胞，在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用 激活T淋巴细胞: CD3+CD25+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD69+ 诱导性T淋巴细胞： CD3+CD4+CD45RA+ 抑制性T淋巴细胞： CD3+CD8+CD28- 细胞毒性T淋巴细胞：CD3+CD8+CD28+ 记忆T淋巴细胞： CD3+CD4+CD45RA-CD45RO+ 未活化T淋巴细胞：CD3+CD4+CD45RA+CD45RO- 淋巴细胞亚群分析 流式蛋白定量技术的应用 （Application of Cytometric Bead Array ） 正常人体内的Th1类细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-2）与Th2类细胞因子（IL-10、 IL-5、 IL-4）保持着相对的平衡。当这种平衡被打破也预示着疾病的发生，肿瘤的发生也伴随着Th1/Th2的转归与变化。由于细胞因子功能的多效性与细胞因子之间存在相互影响与转化，单个细胞因子的变化难以清楚的判断与肿瘤发生发展的关系，Th1 /Th2的分类使肿瘤细胞免疫学的概念清晰化，近年来研究Th1/Th2两类细胞因子的漂移方向逐渐成为热点。 Th1/Th2漂移 CBA简介 Cytometric Bead Array 单个样本，同时定量液相中多种蛋白浓度 抗原抗体反应原理 基于流式细胞仪平台 一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，与待测样 本孵育后，形成“三明治”复合物。 Capture Bead Capture Ab Bead + + Analyte of interest Fluorescent detection Ab 1 2 3 不同强度红色荧光的捕获微球，在FCM FL3检测 不同的目标蛋白 PE 标记的检测抗体，在FCM FL2检测。 荧光强度即为靶蛋白量 4 5 6 CBA检测原理 Cytometric Bead Array (CBA) + IL-8 IL-6 100 100 101 101 102 102 103 103 104 104 Bead Intensity FL3 (670LP) Detector Ab Intensity FL2 (585/42BP) R1 CBA与ELISA比较 分析可溶性蛋白 定量分析结果 高灵敏度 ELISA 抗原检测的经典方法 单项检测 每项实验样本用量50-200?L 酶-底物背景干扰 CV 10-20% BD CBA 流式细胞仪自动检测 多参数同时检测