异丙酚对小鼠脑动脉血管平滑肌细胞BKCa通道钙离子敏感性和通道动力学的作用机制研究.pdfVIP

IIJ[IrllflfllIIfrl l I[rffPIPIflP[If Y1 异丙酚对小鼠脑动脉血管平滑肌细胞BKca通道钙离子敏感 性及通道动力学的作用机制研究 目的：异丙酚是临床最常用的静脉麻醉药之一，该药具有明显的 心血管抑制作用，可引起剂量依赖性的血压下降。其降低血压的机制 主要包括抑制肾素血管紧张素系统，阻断交感神经末梢释放去甲肾上 腺素，抑制血管运动中枢，抑制心肌收缩力，降低心输出量以及对外 周血管的直接扩张作用等，其中血管的直接舒张作用占主要地位。 conductanceCa2+-sensitiveK+ 大电导钙激活钾通道(1arge 的外向电流。BKca通道的激活可使细胞膜超极化，抑制L型电压依 赖性钙通道，抑制胞外钙离子内流，降低胞内钙离子浓度，导致平滑 肌舒张。B比通道在血管平滑肌细胞的广泛分布加之大电导特性决 定了其在调节血管舒缩活动中的重要作用。既往研究表明，BKca通 道的激活可能参与了异丙酚导致的血管舒张；也有学者采用膜片钳技 术直接证实异丙酚对BKca通道有激活作用，但是其具体激活机制， 尤其是对BKca通道的门控动力学机制和作用靶点并不十分清楚。本 研究旨在从分子水平探讨异丙酚对BKca通道钙敏感性、电压依赖性 以及对通道动力学机制的影响。方法：取正常小鼠(15．209，雌雄不 拘)腹腔注射戊巴比妥钠60 mg／kg麻醉后断头，取出大脑组织置于 saline solution，PSS)中，小心分 冰预冷的生理盐溶液(physiological 离大脑底部动脉，经两步法酶消化得到单个平滑肌细胞，4℃保存备 ． ： 用。采用全细胞穿孔膜片钳技术记录BKca通道宏观电流、瞬时外向 transientoutward 钾电流(spontaneous 浓度异丙酚对BKca通道电流的影响；采用内面向外式单通道膜片钳 技术，记录BKca通道的单通道电生理特性，以及不同浓度异丙酚对 通道钙敏感性、电压依赖性和通道动力学机制的影响。结果：①小 鼠脑动脉平滑肌细胞BKca通道具有与人肠系膜平滑肌及其它组织 BKca通道相似的电生理特性，即大电导、钙敏感性、电压依赖性和 钾离子选择性，能被特异性阻断剂IbTX(200nM)阻断。②异丙酚 mV 能明显增加BKca通道宏观电流密度，STOCs的频率和幅度。在+60 12 膜电位时，56州和1IIM异丙酚增加B＆a通道宏观电流密度1．44 倍和2．44倍。在．30 mV膜电位时，56州异丙酚分别增加STOCs的 开放幅度和开放频率1．51倍和1．69倍。③在内面向外膜片下，异丙 酚呈浓度依赖性的增加BKca通道开放概率(total openprobability， NPo)。在+40 mV膜电位下，56州和112州分别使NPo增加52 和112州能使钙离子量效曲线左移，钙离子解离常数(K)由O．887 0M异丙酚)和 pM减小到0．694州(28州异丙酚)，O．599州(56 O．176州(112州异丙酚)。④通道动力学分析结果提示112州异 丙酚能明显增加通道的开放驻留时间和减少关闭驻留时间，并且降低 通道的开放时间常数和增加关闭时间常数。结论：异丙酚呈剂量依赖 性的激活BKca通道