异土木香内酯抑制人子宫内膜癌细胞增殖活性和作用机制探讨.pdfVIP

中文摘要 异土木香内酯抑制人子宫内膜癌细胞增殖活性 及作用机制探讨 摘 要 helenium 目的：土木香(Inula L．)系菊科旋覆花属植物，为多年生 草本植物，广泛分布于欧洲、北美洲及东亚等地区。其根供药用，具有健 胃、利尿、祛痰和驱虫等功效。目前已从土木香中分离得到土木香内酯、 分具有抗肿瘤、抗炎、驱虫、抗菌、降血糖和镇痛等多种生物活性。本实 胞增殖的抑制作用，并进一步探讨异土木香内酯抑制HEC．1细胞增殖的 作用机制。 方法： l MTT(四甲基偶氮唑蓝)LL色法 1．1肿瘤细胞株悬液制备 用RPMI．1640完全培养基调整HEC．1肿瘤细胞株浓度为2×105个／ml 的细胞悬液备用。 1．2体外抑瘤实验 取对数生长期的HEC．1细胞，将细胞悬浮接种于96孔板，每孔50 J，tL 10此。培养4h后， 48h。于培养结束前4h，各培养孔加入5mg／mL的MTT 弃去培养上清，每孔加入反应停止液150“L，振荡10min，使结晶充分溶 解，用酶联免疫检测仪测定各孔吸光度值(OD值)，并计算细胞生存率 据用TheSPSS V13．0软件进行处理，受试药物对细胞的浓度．效应 system 曲线用Hill数学模型拟合，计算药物的IC50值。 2荧光素酶报告基因检测 取对数生长期的HEC．1细胞，以每孔5×104个细胞接种于24孔板中， 中文摘要 h，去培养液，用PBS洗 用含10％FBS的RPMI．1640培养液培养细胞24 RPMI．1640培养液中，混匀室温孵育30 rain后转入培养孔中，每孔25此， h。弃去转染液，更换10％FBS 于饱和湿度、37℃和5％C02培养箱中培养3 的RPMI．1640培养液0．9 mL，于饱和湿度、37℃和5％C02培养箱中培 养24 h。弃去培养液，用1 37℃和5％C02培养箱中培养24 xPLB(passivelysis 比值。 3 Western blotting检测 培养基培养细胞48小时，离心收集细胞，用PBS洗涤细胞后，加入上样 蛋白在SDS．PAGE电泳下分离，电转移至硝酸纤维膜，用5％脱脂奶粉于 室温下摇动封闭膜2 育，lxTBS．T洗膜15 min，共3次后，在二抗稀释液(抗鼠1：5000)中孵育 40 min min。再次洗膜后加入ECL试剂，反应lmin，用X片曝光1--10 后，显影。 4 半胱天冬酶抑制剂对异土木香内酯抑制HEC．1细胞增殖的翻转作用 取对数生长期的HEC．1细胞，将细胞悬浮接种于96孔板，每孔509L (含l×104个细胞)，分别加入含有半胱天冬酶抑制剂(终浓度为20 rtmol／L) 育HEC．1细胞和不含半胱天冬酶抑制剂的异土木香内酯(终浓度分别为 1pmol／L、101maol／L和100 中文摘要