异丙酚对鼠发育中大脑神经干细胞增殖及凋亡的影响及相关机制研究.pdfVIP

＼l删燃 异丙酚对鼠发育中大脑神经干细胞增殖与 凋亡的影响及相关机制的研究 博士研究生：肖华平 指导教师：古妙宁 摘要 每年全世界有成千上万的婴幼儿接受外科手术、有创性治疗或一些需要麻 醉辅助的影像学检查，这些婴幼儿需要接受各种麻醉药和镇静药的辅助治疗， 因此，研究麻醉药对发育中大脑的影响具有重要的临床意义。研究显示临床上 使用麻醉药对发育中的哺乳动物大脑有潜在危害，在大脑快速发育期，也就是 突触形成期，给予麻醉药会引起哺乳动物大脑敏感区域神经凋亡，尤其是在出 生后第七天鼠，对麻醉药的凋亡作用非常敏感。越来越多数据表明麻醉药包括 异氟醚、氯胺酮、NO、咪唑安定、硫喷妥纳、异丙酚、七氟醚对发育中大脑有 毒性作用并且能引起长时期认知功能障碍。神经毒性的严重程度与剂量和暴露 的时间有关，并且复合麻醉后加重，其机制涉及GABA、甘氨酸、谷氨酸、尼古 丁等多个受体和相关的通路，但是其具体的分子机制并未明确。 异丙酚(Propof01)是一种新型的短效静脉麻醉药物，80年代中期开始应用 于临床。1989年美国FDA通过并推荐临床使用，目前被国内外广泛应用于临床 麻醉诱导、维持及ICU镇静。随着临床的广泛应用，人们发现异丙酚有其独特 的优点：起效快，麻醉状态可控性强，维持时间短，苏醒迅速，无积蓄，副作 用小等，在产科和儿科手术也逐渐被推广使用，目前临床上输注异丙酚是否会导 致学习、记忆障碍或者发育延迟还没有报道，但已经有动物研究表明异丙酚对 发育中大脑神经有促凋亡作用，长时间使用异丙酚会导致神经细胞凋亡数明显 增加，并且成年后学习能力缺失，然而异丙酚引起神经凋亡与神经功能损害的 摘要 机制目前还不清楚。 为了探索异丙酚引起细胞凋亡的机制，有学者研究了异丙酚及GABA．A调节 剂对细胞内钙离子及海马神经细胞早期及延迟细胞死亡的影响。研究发现体外 培养出生后第四天海马神经细胞暴露于5umol／L异丙酚5个小时引起细胞去极 化，细胞内钙离子浓度升高，CaSpaSe激活，促进细胞死亡，使用GABA．A受体 阻断剂荷包牡丹碱或者钙通道阻断剂引起细胞内钙离子浓度降低，抑制细胞死 亡，细胞内钙离子浓度升高是细胞凋亡的必要条件，但使用GABA-A激动剂蝇 蕈醇虽然引起细胞内钙离子浓度升高，但没有出现细胞死亡，因此钙离子浓度 升高不能完全解释异丙酚引起的细胞凋亡。细胞凋亡主要通过内源性或者外源 性途径。内源性途径通过下调抗凋亡bcl．2蛋白家族，比如bcl．xL，增加细胞线 外源性通路由死亡受体激活，形成死亡受体复合物，包含Fas、TNF．Q超家族， 起细胞凋亡的原因是什么，它是通过何种凋亡途径引起的，基于此，我们体外 培养大鼠胚胎神经干细胞，用Brdu法观察了异丙酚对胚胎神经干细胞增殖的影 响，采用细胞流式技术观察了不同浓度异丙酚对细胞凋亡的影响，同时提取蛋 靶点，阻断细胞凋亡通路，减轻异丙酚神经毒性作用打下基础。 已经有研究表明干预GABA受体和NMDA受体可以引起神经增殖改变， 而麻醉药的作用受体主要为GABA受体和NMDA受体。因此，麻醉药对发育中 大脑毒性反应除引起凋亡外，也可能对神经增殖产生影响。Stratmann等证实7 日龄使用3．5％异氟醚，发现齿状回神经增殖减少至少持续4天以上，并导致永 久的神经功能损害，而这种现象并没有在出生60天幼鼠发生。异丙酚作为临床 上常用的静脉全麻药，除了对发育中大脑神经有促凋亡作用，那么对于发育中 大脑神经增殖有没影响呢?近来，许多学者对海马齿状回神经干细胞及其子代 细胞生成早期(前4周)的神经元电生理特性进行了研究，发现前体细胞在早 Ⅱ 博士学位论文 期尚未具备自发性或者诱发突触后电位之前即被GABA激动，并可进一步激活 局部神经元之间的GABA电流。在前体细胞分化为粒状神经元后，新生细胞开 始接受突触GABA内向电流，一周后开始接受谷氨酸内向电流。Ge等采用 形成，并且会损害新生神经元树突的发育，提示GABA介导的去极化对于新生 神经元的成熟和功能具有重要的作用。在突触形成期给于麻醉药不仅