基于糖和苯硼酸动态共价键的高效蛋白质表面修饰方法-高分子学报.PDF

第 7 期 高 分 子 学 报 No. 7 2017 年 7 月 ACTA POLYMERICA SINICA Jul., 2017 * 基于糖和苯硼酸动态共价键的高效蛋白质表面修饰方法 ** 林铭昌 陈国颂 (聚合物分子工程国家重点实验室 复旦大学高分子科学系 上海 200433) 摘 要 糖和蛋白质的相互作用参与了很多重要的生命过程. 研究糖和蛋白质的相互作用有多种手段，石英 晶体微天平(QCM)是其中重要的一种. 研究中常需要将蛋白质通过共价键连接在天平芯片的表面. 但是，用 于检测糖分子的蛋白质多为植物凝集素，它们的分子量大，表面可修饰位点少，通过共价键修饰在芯片表 面的效率偏低. 本文提出一种基于糖和苯硼酸之间动态共价键的新修饰方法，能够大幅度提高蛋白质在芯 片表面的修饰效率. 关键词 凝集素，分子自组装，动态共价键，石英晶体微天平 糖类化合物是和核酸、蛋白质并列的3类生 经济的做法，因此涉及到蛋白质在芯片表面的固 物大分子之一，在诸多生命过程中起到了重要作 定. 目前已有的方法包括共价键修饰和非共价吸 [1, 2] [3] 用 ，如精卵结合、病毒入侵、免疫防御等 . 这 附等. 共价键修饰需要蛋白质参与表面化学反 些功能大多是通过糖和凝集素(具有糖特异性结 应，受到反应效率的限制；而非共价吸附则存在 合能力的蛋白质)之间的特异性相互作用来体现 固定不够牢固，重复性差等问题. 考虑到凝集素 的[4, 5]. 因此，糖和凝集素相互作用相关的研究获 多以多聚体的形式存在，相比其他常用的蛋白 得了广泛的关注. 研究这种相互作用的方法有很 质，它们的分子量更大，表面可被修饰/吸附的位 多，比如等温量热滴定、液体核磁共振等. 考虑 点更少，利用上述方法就显得更加困难，修饰效 到糖链多表达在细胞的表面，采用针对固-液界面 率较低，限制了QCM在该领域内的应用. 上的相互作用的研究方法显得尤为重要. 石英晶 我们课题组在前期工作中，曾经利用多组氨 体微天平(QCM) 技术就是其中具有代表性的 酸标签和铜离子之间的金属-配位作用将具有糖 一种. 结合能力的去唾液酸糖蛋白质受体(ASGPR) 固 QCM兴起于20世纪70年代，并在1982年被 定在了QCM金片的表面，并检测了多种含糖聚合 运用在液相体系中[6, 7]. Nomura和Okuhara课题 物和ASGPR 之间的相互作用[14]. 这一结果启发 组完成了相关的实验，这标志着QCM测量液相 我们，利用糖和凝集素之间的非共价相互作用， [8] 体系的开始 . 在液相体系中，QCM技术可以通 对蛋白质进行固定；并利用糖聚合物和凝集素之 过