植物的体外培养.pptVIP

* 低温作用机理：低温改变了小孢子第一次有丝分裂的轴向，从而使小孢子发育启动；延长了小孢子的生活力而提高诱导率；使绝大多数花粉保持存活并完成其诱导过程。主要是第一个机理。 组织培养技术的主要阶段 组织与器官培养技术包括实验室设计、建造和设备；培养基的配制；表面灭菌和接种；试管苗出瓶移栽及后期管理。整个过程分三个阶段： 1.无菌培养的建立 主要考虑选择外植体、培养基和环境条件的性质。 2.培养再生植株 利用诱导产生愈伤组织和利用茎尖培养诱生不定新梢等途径。 3.准备将再生植株移栽入土 包括新梢插条的生根、植株的锻炼和使植株由异样状态变为自养状态。 是指植物某一器官的全部或部分或器官原基的培养，包括茎段、茎尖、球茎、叶片、子叶、花序、花瓣、子房、花药、花托、果实、种子等。 此处指形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织与各种器官 组织以及愈伤组织的培养。 器官培养（Organ culture ） 组织培养（Tissue culture） 茎尖培养 1、类型 小茎尖： 大茎尖： 材料体积小，不带叶原基的培养难，成苗所需时间长，体积大的则易于成功。 2、作用 无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究 10-100?m的茎尖分生组织（脱毒） 几十mm茎尖或更大的芽（快繁） 3、建立无菌材料及培养 健康植株上选健壮的枝梢 去叶片用自来水冲洗 再生 培养 MS培养基 75%酒精1分钟 次氯酸钠5-10分钟 0.1%升汞 4、茎尖培养的发育方向 腋芽萌发 脱分化后产生胚状体 脱分化后直接产生不定器官 脱分化后形成愈伤组织 离体繁殖 建立悬浮系或分化胚状体及不定芽 影响发育方向的因素 外植体大小 培养条件 培养基生长调节剂种类与浓度 微形外植体或分生组织易产生愈伤组织 细胞分裂素与生长素的配比是关键 技术上的问题 愈伤组织往往经过多次继代以后，其分化器官的能力日衰,甚至丧失； 如何使愈伤组织分化的植株保持遗传性的稳定性。 污染、褐变与玻璃化 真菌污染长孢子 真菌污染长孢子 污染的情况 细菌污染长菌落 细菌污染长菌落 初代培养外植体的褐变 外植体褐变是指在接种后，其表面开始褐变，有时甚至会使整个培养基褐变的现象。它的出现是由于植物组织中的多酚氧化酶被激活，而使细胞的代谢发生变化所致。在褐变过程中，会产生醌类物质，它们多呈棕褐色，当扩散到培养基后，就会抑制其他酶的活性，从而影响所接种外植体的培养。 褐 化 褐变的主要原因 ①植物品种 在不同品种间的褐变现象不同。多酚氧化酶活性上的差异。因此，在培养过程中应该有所选择，对不同的品种分别进行处理。 ②生理状态 由于外植体的生理状态不同，所以在接种后褐变程度也有所不同。一般幼龄期的植物材料褐变程度较浅，成年的植株采收的外植体，由于含醌类物质较多，因此褐变较为严重。幼嫩的组织在接种后褐变程度并不明显，老熟的组织较为严重。 ③培养基成分 浓度过高的无机盐会使某些观赏植物的褐变程度增加，此外，细胞分裂素的水平过高也会刺激某些外植体的多酚氧化酶的活性，从而使褐变现象加深。 ④培养条件不当 如果光照过强、温度过高、培养时间过长等，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速被培养的外植体的褐变程度。 减轻褐变现象发生的方法 ①选择合适的外植体 一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体，这样可以使褐变现象明显减轻。 ②合适的培养条件 无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。 ③使用抗氧化剂 在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸、PVP等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。另外，使用0.1%-0.5%的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果。 ④连续转移 对容易褐变的材料可间隔12~24h的培养后，再转移到新的培养基上，这样经过连续处理7-l0d后，褐变现象便会得到控制或大为减轻。 继代培养时材料的玻璃化 实践表明，当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这种现象通常称为玻璃化。它的出现会使试管苗生长缓慢、繁殖系数有所下降。玻璃化为试管苗的生理失调症。 因为出现玻璃化的嫩茎不宜诱导生根，因此，使繁殖系数大为降低。在不同的种类、品种间，试管苗的玻璃化程度也有所差异。当培养基上细胞分裂素水平较高时，也容易出现玻璃化现象。在培养基中添加少量聚乙烯醇、脱落酸等物质，能够在一定程度上减轻玻璃化的现象发生. 呈现玻璃化的试管苗，其茎、叶表面无蜡质，体内的极性化合物水平较高，细胞持水力差，植株蒸腾作用强，无法进行正常移栽。这种情况主要是由于培养容器中空气湿度过高，透气性较差造成的，其具体解决的方法为： 增加培养基中的溶质水平，以降低