油污土壤植物及真菌联合生物修复探究.docVIP

油污土壤植物及真菌联合生物修复探究摘 要：利用具有石油烃降解能力的真菌与植物复配，探讨不同植物与真菌联合修复油污土壤的效果。将4种植物（玉米、玉米草、黑麦草、紫花苜蓿）与2种真菌（Fungal sp.、Stachybotrys sp.）在5种浓度油污土壤（0.1%，0.5%，1%，1.5%，2.0%）中进行单接种及双接种种植试验，以7 d为单位测定石油烃降解率，筛选出对各浓度油污土壤修复效果最佳的复配方案。结果表明，玉米、玉米草和黑麦草单接种处理原油降解效果较好，且在油污浓度为1%时，3种植物均达到最高的降解效率。当油污浓度高于1.5%时，紫花苜蓿混合接种处理对油污的降解率明显升高，最大可达到87%。紫花苜蓿在混合接种条件下更适合高浓度油污土壤的生物修复，推广价值更大。 关键词：油污土壤；植物-真菌联合修复；单接种；混合接种 中图分类号：X172 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.018 在原油的开采、运输、使用以及石油产品的加工和生产过程中，不可避免的泄露对环境造成了严重的危害，尤其是对土壤。原油的成分复杂，包括直链烷烃、支链烷烃、多环芳烃（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs）等多种化学成分，其中16种多环芳烃已被世界环境卫生组织列为具有高度危害的环境污染物之一。多环芳烃在生成、迁移、转化和降解的过程中，通过呼吸道、皮肤、消化道进入人体，极大地威胁着人类的健康，有很强的致畸、致癌、致突变作用[1-4]。研究发现，细菌、真菌、藻类都具有降解多环芳烃的能力，随着PAHs苯环数量的增加，其降解速率也越来越低，所以低分子量的PAHs在环境中能较快地降解，存在的时间短；而高分子量的PAHs难于降解[5]。 植物-微生物联合治理环境污染是近年来人们研究的热点，其高效、简便、无二次污染的优点是其被广为采纳的重要原因。胡长庆等[6-7]从油污土壤及海水中分离出了3种丝状石油降解真菌，在实验室的模拟污染土壤修复试验中均表现出了良好的石油降解能力，并探索了复合菌群最佳原油降解条件。笔者利用已筛选出的能够有效降解石油烃的2种真菌以及适应北方寒冷气候的植物，研究真菌与植物联合对土壤中石油污染的修复效果，并寻找二者的最佳组合及实施方案，在修复土壤中污染物的同时，恢复污染土壤的植被，达到污染土壤生态修复、改善土壤微环境的目的。 1 材料和方法 1.1 材 料 1.1.1 植物与真菌 选取适宜北方寒冷地区生长的4种禾本科与豆科植物，分别为玉米、玉米草、黑麦草和紫花苜蓿。种子由大庆市种子公司提供。供试真菌为已鉴定具有较好石油烃降解能力的真菌（Fungal sp.）和葡萄穗酶菌（Stachybotrys sp.），以下用H3和H4代替，菌种经活化，在CPDA平板上扩大培养后作为供试菌剂。 1.1.2 油污土壤 采集大庆地区星火牧场5～10 cm土层土壤，阴凉处风干，过4 mm筛，去除草根、枯草等。将取自大庆油田的原油在90 ℃蒸发3 h，去除易挥发的短链烃后[8]，用适量石油醚溶解配制成10%的原油原液，与风干的土壤混匀，配制成浓度分别为0.1%，0.5%，1%，1.5%，2%的油污土壤，分装到直径10 cm的营养钵中，待用。 1.2 方 法 1.2.1 种子的处理 4种植物的种子在0.05%的高锰酸钾溶液中浸泡1 h，洗掉高锰酸钾溶液后用蒸馏水冲洗3遍，洗净种子表面的高锰酸钾溶液。将种子放在湿润的脱脂棉上，放入恒温培养箱中25 ℃诱导发芽48 h后播种。每个营养钵中播种15粒，表面覆土约1 cm。 1.2.2 制备菌块 将无污染的H3、H4固体菌种连同培养基切成1 cm×1 cm的小正方形，接种到新配制的CPDA固体培养基上，26 ℃倒置培养。待长满平板后，选择灭菌直径为1 cm的打孔器进行打孔，从打孔器中取出菌块接种于油污土壤中。 1.2.3 不同接种方式的原油降解试验 选取油污浓度为1%的土壤，对4种植物分别进行不同接种方式的原油降解试验，即玉米、玉米草、黑麦草和紫花苜蓿四种植物与H3单接种，与H4单接种，与H3、H4混合接种进行原油降解实验。在种子长出子叶后的第7，14，21，28，35天分别测定原油降解率，探讨接种方式对植物-真菌联合修复的影响。 1.2.4 不同油污浓度的原油降解试验 4种植物均采用混合接种方式即H3和H4联合接种，接种于5种油污浓度的土壤中进行原油降解试验，在种子长出子叶后的第7，14，21，28，35天分别测定原油降解率，探讨植物-真菌在不同油污浓度下的降解效果。 1.2.5 原油降解率测定 对每个处理分别在第7，14，21，28，35天时，取土