眼内Foxp3+Treg细胞的上游信号调控机制及其及眼免疫赦免的关系.pdfVIP

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眼内Foxp3Treg细胞的上游信号调控机制及其及眼免疫赦免的关系

摘要 目的 T 研究小鼠眼内Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(regulatorycell,Treg细胞)的形 成机理以及其上游信号开关c.Rel调控小鼠眼内Treg细胞形成的机制,进一步揭示 Treg细胞参与眼免疫赦免的发生机理。 方法 (一)、眼微环境诱导Treg细胞形成的研究 眼房水(3.O×),用于体外培养naive 0.5 TGFB一1)体外培养naiveCD4+细胞, ng/ml、lng/ml、4ng/ml、20ng/ml、100ng/ml fluorescence 析以上各组Foxp3平均荧光强度(Meanintensity,MFI)数值的区别。 B6小 2)体内实验分析Treg细胞是否可以在眼内被诱导形成:应用OVA.TCR.Tg 鼠,眼内注射OVA,应用流式细胞仪技术检测不同时间模型眼Treg细胞占眼内CD4+ 细胞的百分率,并与外周血、脾脏、引流淋巴结Treg细胞百分率进行比较,分析眼 微环境是否能诱导Treg细胞形成。 (二)、眼内Treg细胞形成上游c-Rel信号通路的研究 CD4+ 1)体外实验应用WTB6小鼠眼房水,分别培养c.Rel基因敲除/B6小鼠naive 细胞与WTB6小鼠naive 分析以上各组Treg细胞的百分率,观察不同组问Treg细胞形成率的区别。 PCR 胞的百分率,并与非基因敲除鼠葡萄膜炎模型进行对比。并同时应用real.time mRNA、IL.17 检测的Foxp3 mRNA表达量在c.Rel基因敲除后的变化。 (三)、c-Rel信号通路与角膜移植术后免疫斥反应关系的初步研究 RT-PCR检测排斥组与 建立异系小鼠穿透性角膜移植术(Plo)模型。Real.time mRNA表达水平的变化。分析c.rel 未排斥组眼内Foxp3mRNA、Thl7mRNA、e-rel 信号通路与Treg细胞、Thl7细胞形成的关系。 结果 TGFp.1组,但是其Foxp3十的MFI 房水诱导Treg细胞形成的能力约等于0.5ng/ml 却高达70-t-2,超过了20ng/ml 于淋巴结内Treg细胞百分率(pO.05)。 有统计学意义(p0.05)。同期空白对照组几乎不能产生‘Treg细胞。体内实验显示 real.time mRNA与IL-17mRNA在cRel基因敲除后也发生了显 PCR检测的Foxp3 著的降低(p0.01)。 低时c-RelmRNA的表达量也降低。 结论 细胞并不单纯来自于引流淋巴结,而是在眼内特殊免疫微环境中被诱导产生;眼部 微环境诱导的Treg细胞其Foxp3的免疫抑制功能较强,这很可能是眼具有免疫赦免 功能的重要原因。c-Rel是调控眼内Treg细胞形成的重要的上游信号通路,参与调 节眼免疫赦免。 博士研究生:王婷(眼科学) 指导教师:史伟云主任医师、教授 关键词:Treg细胞;e-Rel;眼免疫赦免 Abstract Purpose: To T beinduced whether cells)will

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