紫外线影响晶状体上皮细胞缝隙连接通讯的探究.pdfVIP

㈨IIII I III IIIIII IIIIIII Y1 893373 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………。1 英文论著摘要……………………………………………………………………．5 在学期间科研成绩………………………………………………………………64 致谢………………………………………………………………………………………………………。65 个人简介…………………………………………………………………………66 ·中文论著摘要· 紫外线影响晶状体上皮细胞缝隙连接通讯的研究 目的 长期慢性的紫外线辐射(UltravioletRadiation)被认为是老年性白内障形成的 主要原因。有关紫外线辐射导致白内障的机制还不太清楚，国内外大量学者已从 紫外线对晶状体蛋白的氧化损伤及DNA的直接损伤方面探讨了紫外线与白内障 形成的关系。最近的研究表明，晶状体在无氧条件下受紫外线辐射也会出现离子 平衡紊乱。因此，有人认为紫外线对调控细胞间离子平衡的膜通道也具有损伤作 JunctionIntercellular 用。缝隙连接(GapJunction)介导的细胞问通讯(Gap 细胞间离子平衡。晶状体上皮细胞间GJ是相邻的晶状体上皮细胞间缝隙连接蛋白 伤作用呢?本研究依据以上推测，探讨Connexin43是否是UVA对晶状体损伤的 潜在靶点，同时观察UVA对晶状体上皮细胞的这种损伤作用是否是可逆的，进一 步分析这种损伤作用会有哪些细胞内传导通路的参与。 材料与方法 1、细胞培养、UVA照射及测定细胞存活率 细胞选取人晶状体上皮细胞SRAOI／04，培养于DMEM。UVA照射强度分别 为0、5、10、20、40J／era2。细胞生存率由CCK-8试剂盒测定，OD450值为不可 逆细胞凋亡比例。并且根据不同照射强度下晶状体上皮细胞存活率，选择UVA的 最适实验强度。 2、测定CX43mRNA和蛋白含量以及SLDT实验 实验分组是按UVA照射和空白对照分为两组。同时UVA停止照射后，会有不 同观察时间点，我们选取停止照射后的0、l、2、4、8、16d时。SRAOI／04细胞 经10 J／cm2UVA照射后，按照预先设定的不同时间点，分别提取细胞总RNA，逆 转录为eDNA，定量real．timePCR测定细胞内CX43的mRNA含量以及停止照射后 l 抗体，运用Western-blot方法测定CX43蛋白含量以及停止照射后的蛋白变化趋势。 黄(Lucifer 痕后，分别在上述时间点由多聚甲醛固定，观察LY和RD的扩散速度，经荧光显 微镜数字成像系统照像。 3、测定细胞内活性氧、脂质过氧化程度以及PKC活性 SRA0I／04细胞经UVA照射后，在上述时间点，运用流式技术测定细胞内活 性氧(ROS)的含量及变化趋势，运用MDA检测细胞脂质过氧化程度及变化趋 势。同样的，PKC的活性也经由上述干预因素处理后，运用PKC活性检测系统 Genmed，检测PKC活性及变化趋势。 4、统计学方法选择 实验数据用均数4-标准差表示。使用SPSS13．0统计软件进行数据处理和t检 验，PO．05认为有统计学意义。 实验结果 1、不同强度的UVA对SRAOI／04存活率的影响 晶状体上皮细胞SRAOI／04在不同强度的UVA照射后，会出现细胞存活率的 J／cm2时，细胞存活率约 改变。细胞存活率由CCK-8检测。当UVA照射强度为5