线粒体膜通透性转换孔在大鼠非酒精性脂肪性肝病中的作用和其机制研究.pdfVIP

＼1鼎删 线粒体膜通透性转换孔在大鼠非酒精性脂肪性肝病中 的作用及其机制研究 摘 要 目的：非酒精性脂肪性肝病(non．alcoholic脚1iver 是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的，以弥漫性肝细胞大泡性脂肪 变为主要特征的临床病理综合征。近年来NAFLD的发病率呈上升趋势，严 重危害人民健康，而其发病机制仍不十分清楚，最新研究表明肝细胞凋亡 在NAFLD的发生进展中扮演了至关重要角色。线粒体膜通透性转换孔 (mitochondrialtransition penIleability 流的中心枢纽，其病理开放状态可以导致线粒体跨膜电位(△1lrm)毁减、 factor， AIF)释放到胞浆，从而决定着线粒体功能的发挥并诱导细胞凋亡的发生。 本实验旨在通过改良高脂饮食建立NAFLD大鼠模型，连续动态时间点观察 的关系，以求深入探讨NAFLD的发病机制并为临床开发研制抑制肝细胞凋 亡药物、阻断NAFLD进展提供有力的理论依据。方法：健康成年雄性 正常饮食组给予基础饲料(泸州医院实验动物中心提供)，模型组给予高脂 饮食(即制备的改良高脂饲料：胆固醇2％，胆酸钠O．5％，丙硫氧嘧啶O．2 ％，蔗糖5％，猪油10％，基础饲料82．3％)，两组饮料均为自来水，自由 饮用。造模4、8、12、16周末时处死对照组和模型组各5只大鼠，腹主动 脉采血，测定各组大鼠血脂和血清转氨酶值，以观察大鼠NAFLD模型病情 进展；然后迅速取出肝脏称肝湿重，计算：肝湿质量／体质量×100％，即为 肝指数。并取肝组织标本，制备石蜡切片，行苏木精．伊红(HE)染色观 察肝组织光镜下的病理改变，并观察肝脏纤维化程度；采用脱氧核糖核苷 计量资料用均数士标准差(i士S)表示，采用t检验，组间比较采用方差分 析，方差齐者采用单因素方差分析，方差不齐者采用H检验，比较模型组 与对照组及模型组间在血清学、病理学、细胞凋亡程度和ⅧTP开放情况 的差别；计数资料采用卡方检验；两者相关性分析采用直线相关分析， 尸0．05为差异有统计学意义。结果：实验大鼠40只全部进入结果分析。(1) 随造模时间延长，F组大鼠肝指数、血脂及血清转氨酶水平明显增高，肝组 织脂肪变、炎症程度逐渐加重，后期出现少数纤维化表现。(2)F组4、8、12、 16周动物肝组织出现轻至重度肝细胞脂肪变性，以中央静脉周围最为明显， 随造模时间延长脂肪变程度逐渐加重，均高于对照组(PO．05)；F组大鼠肝脏 可见程度不等的小叶内炎症、汇管区炎症，并有汇管区变性及点状或灶状 坏死，甚至部分坏死融合成片，4、8、12、16周F组肝脏的炎症活动度评分 F组与C组具有 分别为2．43±O．96、2．48±O．9l、2．23±1．oo、2．38±O．93， 显著差异(尸O．01)；实验大鼠肝细胞凋亡程度与肝组织脂肪变、炎症及纤 细胞线粒体A54嘶值与肝组织脂肪变、炎症程度以及肝细胞凋亡呈负相关 用改良高脂饲料建模的方法，可以缩短构建NAFLD大鼠模型时间，降低了 实验成本且模型基本符合人类发病的自然状态，是一种理想的建模方式。 2．在№虾LD大鼠模型中肝脏病变程度、肝细胞凋亡与肝细胞浆c”．c浓度 呈正相关，与肝细胞线粒体A5‰值呈负相关，即肝细胞MPTP开放程度与 着NAFLD病情的进展而逐渐增加。 关键词：非酒精性脂肪性肝病；细胞凋亡；线粒体膜通透性转换孔；细 ’ 胞色素．C；大鼠 Studiesontheroleand mechanismofmitochondrial