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胃肠 间质瘤 差 异表 达 m iR 入A 的筛选 研 究 目录 目录 中文 摘 要 ……1 A b Stract… …3 符 号 说 明 ……5 引言 ……6 第 一 部 分 G lsT 中差异表 达 而 R N A 的筛选 ……8 1.1 材 料 和 方 法 …… .‘…… 8 1.2 结果 …… 13 1.3 讨 论 …… 18 第 二 部 分 G IST 中差 异 而 RN A 的 R l飞P C R 验 证 ……、……24 2.1 材料 与方 法 ……，……24 2.2 结果 ……27 2 .3 讨 论 ……，…… 30 2 .4 结论 …… 31 第 三 部分 差异表 达 而 R N A 的生 物 信 息 学研 究 ……32 3.1 对 象和 方 法 …… 32 3.2 结 果……，…… 32 3.3 讨 论 …… 38 3 .4 问题 和 展 望 …… 42 3.5 总 结 ……，……42 参 考 文献 ……43 附录 致 谢 ……48 综 述 ……49 附表 ……60 胃肠道 间质瘤 差异表达 m iR N A 的筛选 研 究 中文摘 要 中文摘要 背景与 目的 : 微 小 R N A (m icroR N A s，m iR N A s) 是 一 类 长 约 22 nt 的 内源 性 非 编 码 R N A ， 在 转 录 后 水平 调控 靶基 因 n识凶A 。越 来越 多 的研 究证 实 m 1R N A 在 肿 瘤 的发 生 、 侵 袭 、转 移 、耐 药 等 过程 中起 着 重 要 的作 用 。但 是 关 于 G IST 中 m iR N A 的研 究 还 比较 少 ，本 课 题 为 了探 讨 而 R N A 在 G IST 发 展和 耐 药过 程 中的作用 ，采 用 基 因芯 片 检 测 了耐 药 组 、恶 性 组 和 交 界 组 G IST 中 m iR N A 的表 达 情 况 ，筛 选 出不 同组 别 间差异 表达 的 m iR N A ，并利 用 实 时荧光 定量 P C R (real一t而 e P C R ) 技 术 在 30 个扩 大 样本 中来验 证 芯 片结果 的准确 性 ，再通 过 生物 信 息学预测 和 分析靶 基 因 ，总 结 出 m 1R N A 与 G IST 的 内在 联 系 。 方 法 : 收集 了 10 例 胃肠 间质 瘤 标 本 ，根 据 病 史及 术 后 的病 理 诊 断分 为三 组 ，耐 药 组 4 例 ，恶性 组 3 例 ，交界组 3 例 。抽提 总 R N A 后 ，利用 A gilent 人 而 cr0R N A 寡 核普 酸基 因芯 片 V 3 (955 个 已知 的 m 1RN A ) 进 行检测 ，建 立 GI ST 的 而 R N A 基 因表 达 谱 ，筛选 出不 同组 别差 异表 达 的 m iR N A 。选 取 耐 药 组 与 恶 性 组 之 间 3 个 、恶 性 组 与 交 界组之 间 4 个 差 异表 达 最 明显 的 而 R N A ，利 用 实 时荧光 定 量 P C R (rea l一t加 e P C R ) 技 术 ，在 30 个 扩 大 样 本 中进 行验 证 ，证 实 了其 中 3 个 差 异 表 达 的 而 R N A 。利 用 PicTra 、几rgetscan 、m iRanda 等 生物 数据 库 预 测 这 些 而R N A 的靶 基 因 ，从这 些靶 基 因 中找 出可 能与肿 瘤 相 关 的基 因 。运 用 K 卫G G 数据 库 分 析 靶 基 因在 信 号通 路 中 的作 用 ，总 结 出与 GI ST 发 生 、发 展 和 耐 药 相 关 的 而R N A 及 其 调控 机 制