ProteinA磁性纳米颗粒载体的制备及应用.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１）：１３～１７ ＰｒｏｔｅｉｎＡ磁性纳米颗粒载体的制备及应用 １ ２ １ １ 卢　瑛 　丁华平 　徐　宏 　古宏晨 （１上海交通大学微纳科学技术研究院微米／纳米加工技术国家重点实验室 薄膜与微细技术教育部重点实验室　上海　２０００３０） （２上海奥润微纳新材料科技有限公司　上海　２００２３３） 摘要　采用合成的表面氨基化磁性纳米颗粒，通过化学共价交联制备了葡萄球菌ＰｒｏｔｅｉｎＡ磁性 纳米颗粒载体（ＳＰＡＭＰ），探讨了载体制备的优化条件，根据生物分子特异性亲合作用原理，在外 ? 加磁场的定向控制下，通过亲和吸附、清洗和解吸附等操作，探讨了ＳＰＡＭＰ载体在抗体分离纯化 ? 领域的应用可行性。载体制备优化实验结果显示，通过改变蛋白质浓度、交联剂浓度和交联剂活 化时间可以制备不同表面密度的ＳＰＡＭＰ载体。３００ｇＳＰＡ，２．５％ （Ｖ／Ｖ）戊二醛浓度和３ｈ的活 ? μ 化时间可以获取表面密度高达３５ｍｇＳＰＡ／ｇ磁性纳米颗粒的载体。此外，应用结果显示每克ＳＰＡ ＭＰ磁性微球载体可以结合约１５～１８ｍｇ的ＣＤ２５抗体，同时可有效地分离纯化人抗血清样品中 ? 的ＩｇＧ抗体。 关键词　磁性纳米颗粒　ＰｒｏｔｅｉｎＡ　抗体分离纯化 中图分类号　Ｑ８１９ 　　超顺磁性纳米颗粒作为一种新型的功能材料有着 快速、简便、选择性高、回收率高、重复性好且易于自动 极具潜力的应用前景。通常，超顺磁性纳米颗粒在外 ［１０］ 化操作等显著优势。ＨｏｌｓｃｈｕｈＫ等 使用ＳＰＡ磁性微 加梯度磁场的作用下被磁化而发生定向移动，可以从 球载体（ＭａｇＰｒｅｐ ＰｒｏｔｅｉｎＡ）进行了１００Ｌ细胞培养上  介质中被分离出来；当外加磁场撤离后，超顺磁性纳米 清样品的抗体分离纯化实验，结果显示其分离效果不 颗粒又可以重新悬浮在液体中，具有良好的分散性能 亚于目前的ＥＢＡ（ｅｘｐａｎｄｅｄｂｅｄａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ）色谱分离 与可操控性。由于磁性分离技术本身的易操作性，低 法，且分离时间由原来的２２．５ｈ缩短到４ｈ。由此可见， 成本及易于放大等特性，该技术近年来已被广泛地应 磁性分离载体今后有望用于大规模，工业级的分离纯 用于临床诊断、靶向药物、细胞分离和分类、蛋白质分 化领域，是一种具有较大发展潜力的分离工具。目前 离纯化和核酸提取等领域［１～６］。 国内研究者大多使用的是国外公司的市售磁性微球或 　　葡萄球菌蛋白Ａ（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌｐｒｏｔｅｉｎＡ，ＳＰＡ）是 相关试剂盒产品，价格非常昂贵；国产的高质量磁性微 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁上的一种表面蛋白，位 球及其应用产品研发尚属于起步阶段，且在应用上主 于菌体表面。ＳＰＡ能与人及多种哺乳动物血清中的免 要集中于细胞分离与核酸纯化领域，蛋白质的磁性分 疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ）的Ｆｃ片段相结合，该特异性被广泛 离则比较少，以磁性免疫微球的应用和酶的分离纯化 ［７～９］ 应用于生物分离、医学分析和检测等领域 。 ［１１，１２］ 为主 。本研究旨在应用本课题