一种新的中温酸性α-淀粉酶的分离纯化及酶学性质.docVIP

一种新的中温酸性α-淀粉酶的分离纯化及酶学性质 应用与环境生物学报2008,14(2):235～239 Ch/nJApplEnvironBiol=ISSN1006-687X2008-04-25 一 种新的中温酸性一淀粉酶的分离纯化及酶学性质 刘旭东徐岩 (江南大学生物工程学院/工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036) 摘要从Bacillussp.中分离纯化了一种新的中温酸性a一淀粉酶,并对其酶学性质进行了研究.粗酶经硫酸铵沉淀, DEAE—SepharoseFastFlow阴离子层析,SephadexG-75凝胶过滤层析等步骤后获得电泳均一的a一淀粉酶,其分子量 (M)约为56×10.该酶最适反应pH为5.0,在pH5.0～l1.0范围内稳定,具有较好的耐酸特性.该酶最适反应温度 为40～50,在40～60范围内稳定.在60,pH4.5时,该酶能快速有效水解可溶性淀粉;在pH5.0时该酶对多 种生淀粉底物也具有良好的水解作用.因此,该酶有助于解决中温条件淀粉加工行业中,液化酶和糖化酶由于适用pH 值的差异而无法联用的难题,是一种具有研究价值和应用前景的中温酸性一淀粉酶.经LC—MASS—MASS分析得到了酶 蛋白中两个肽段的氨基酸序列,通过比对发现,该酶与NCBI中已报道的a一淀粉酶序列具有一定的同源性,同时,在氨 基酸水平上也存在着差异.图6表1参20 关键词中温酸性a一淀粉酶;生淀粉;纯化;酶学性质 CLCTQ925.1:Q936 PurificationandPropertiesofaNovelAcid-stableAlpha AmylasefromBacillussp. LIUXudongamp;XUYan (KeyLaboratoryofIndustrialBiotechnology,MinistryofEducation,SchoolofBiotechnology, SouthernYangtzeUniversity,Wuxi214036,Jiangsu,China) AbstractAnovelacid—stablea—amylasefromBacillussp.waspurifiedreaching34foldsofeleetrophoretiehomogeneitybyse— quentialammoniumsulfateprecipitation,DEAE—SepharoseFastFlowchromatographyandSephadexG-75chromatography.The enzymehadamolecularweightof56×10estimatedbySDS—PAGE.Thepurifieda—amylaseexhibitedthemaximumactivityat pH5.0and40～50oC.Furthermore.theenzymeperformedstableoverthepHrangeof5.0～11.0andat60oC.Theenzyme preparationcouldefficientlyhydrolyzesolublestarchatpH4.5,andhydrolyzevariousrawstarchesverywellatpH5.0.These featuresareveryimportantforindustrialstarchliquefaction.Fromtheapplicationpointofview.thisa—amylasecouldbeapo— tentialcandidateforsynergisticusealongwithamyloglucosidaseinstarchprocessingindustry.Theaminoacidsequencesoftwo peptidesfromthepurifiedenzymewereanalyzedbyLC—MASS—MASS.andtheenzymedidnotshowstrictidentitytothea—am— ylasesreportedforsomedifferencesinaminoacidresidues.Fig6,Tab1,Ref20 Keywordsacid—stablea—amylase;rawstarch;purification;enzymaticproperty CLCTQ925.1:Q936 . 淀粉酶(1,4一a—D一葡萄糖苷水解酶,EC3.2.1.1)从淀粉 糖链内部水解1,4一a—D一葡萄糖苷键,广泛应用于燃料酒精,淀 粉糖浆,传统酿造,食品加工,纺织退浆等行业.近年来,伴随国 内外淀粉质原料深加工工业不断发展,一淀粉酶的应用领域不 断扩大,开发筛选具有各