转录因子FoXO3a异常在慢性粒细胞性白血病细胞中作用机制的探究.pdfVIP

摘要 摘要 背景：慢性粒细胞白血病(Claonic MyelocyticLeukemia，CML)是--种致命 性的恶性造血干细胞疾病，发生源于人9号和22号染色体的易位，导致费城染 的酪氨酸激酶活性，过度激活下游Ras、P13K／Akt等信号通路导致肿瘤的发生。 FoxO蛋白家族作为转录因子通过调节细胞内多种重要基因的表达，而介导细胞 周期、DNA损伤修复、凋亡、氧化应激、细胞分化代谢等细胞生理过程，与肿 瘤的发生关系密切。hSHIP(HumanSH2一containing 肌醇磷酸酯酶家族，含SH2结构域肌醇磷酸酯酶能通过负调控P13K／Akt信号 通路对造血细胞增殖、存活及终末细胞活化起作用。本文主要通过血清剥夺实 Fox03a表达含量调节和细胞定位的改变及可能的机制；并构建特异性干扰 细胞生存及凋亡的影n向。 方法：免疫组化法检测Fox03a的细胞定位改变；转化提取含hSHIP基因 光显微镜观察转染效果，半定量RT-PCR法及western blotting检测Fox03a、Akt 的mRNA及蛋白表达含量及磷酸化变化；合成特异性干扰Fox03a的shRNA， 质体法转染K562细胞，westem 色法分析细胞凋亡；MTT法检测细胞生长影响。 结果：免疫组化实验证明，血清激活P13K／Akt信号通路可导致Fox03a蛋 mRNA、总Akt蛋白及Akt磷酸化水平明显下 与对照组(K562／GFP)相比，Akt ．Fox03a干扰质粒并转染K562细胞，结果显示Fox03amRNA及蛋白的表达含 摘要 量明显减少。与对照组相比，Hoechst33258／PI枪测显示干扰组细胞凋亡明显减 少；MTT法显示K562细胞生长显著增加。 结论：转染hSHIP基凶能明显增加Fox03a的表达量，减少Akt的表达及 活并抑制细胞凋亡。提示Fox03a有抑制K562细胞的增殖，同时促进凋亡的作 用。 关键词：Fox03a；hSHIP；K562细胞：RNA干扰； 2 ABSTRA(了 ABSTRACT alethal Background：Chronicmyelocyticleukemia(CML)ishematopoietic stemcell characterizedthe translocation，a malignancy by t(9，22)chromosomal translocationbetweenthe almsofchromosomes9and inthe long 22，resulting fusion formationofthe andBCR／ABL Philadelphia(ph)chromosomeprotein． BCR／ABL active kinase interactswitha exhibitingconstitutivelytyrosineactivity numberof moleculestotheactivationofdownstream signaling leading signaling as are forthe suc