转染TFPI-2重组质粒对肺癌细胞NCI-H460的作用.pdfVIP

转染TFPI．2重组质粒对肺癌细胞NCI．H460的影响 硕士生姓名： 王晓明 指导教师： 王衍富教授 专业名称： 老年医学 摘要 背景：肺癌在全世界范围内的发病率和病死率居恶性肿瘤之首，严重影响着人 smallcell 类的生命健康，其中非小细胞肺癌(non lung 者在初诊时即已发生转移，给临床治疗增加了难度。分子生物学研究表明，肺癌的 发生是一个多因素共同参与、多阶段的复杂生物学过程，与癌基因激活、抑癌基因 失活密切相关。因为NSCLC的现阶段临床治疗局限于化疗、放疗及手术，基因治 疗尚处在科研开发阶段，故探索NSCLC发病的分子机制及新的干预靶点，具有重 要的临床意义。 Factor 目前研究显示，人类组织因子途径抑制因子．2(Tissue Pathway S等人对 达状态，而在恶性程度比较低的肿瘤细胞中其表达量相对较高。Sajani TFPI．2在人类肺部肿瘤的侵袭与转移中所起的作用进行了大量研究，其研究结果 证实在肺部肿瘤细胞中，TFPI-2的低水平表达可大大增强肿瘤细胞A549的存活能 力及生长速度，并且与肺部肿瘤的侵袭与转移有一定关系。因此本实验着手于研 移的几率。 目的：观察基因转染后的肿瘤细胞形态学变化，检测基因转染前后TFPI．2在 作用，为肺癌的临床治疗提供新的理论依据。 方法：通过脂质体(LipofectamineTM2000)将人类TFPI一2重组质粒转染人大细 Time 镜检测转染效率，观察转染后NCI．H460细胞的形态学变化，采用RT。Real PCR及免疫荧光、Westemblot等技术从RNA水平以及蛋白水平检测转染后 胞的凋亡和周期变化。 结果： 1．转染率 荧光显微镜下见转染率达98％以上。 2．RT．RealTime PCR结果 与空白组及阴性组相比，实验组中TFPI．2RNA表达水平提高，并且随着PCR 循环次数的增多，TFPI-2CDNA浓度明显增高。运用重复测量资料的方差分析， 实验组与空白组及阴性对照组之间比较均有差异(P0．05)，而空白组与阴性组经 统计学分析无明显差异(Po．05)。 3．免疫荧光及Westernblot检测蛋白表达 荧光显微镜下，与空白组及阴性对照组相比，实验组中TFPI．2蛋白表达水平 有较大程度提高。Western 果，实验组与空白组及阴性对照组之间差异比较均有统计学意义(PO．05)，而空白组 与阴性组经统计学分析无明显差异(P0．05)。 4．流式细胞技术检测结果 4．1细胞周期阻滞检测结果显示，转染48．72小时后，实验组细胞明显被阻滞 于G1／S期，而空白组与阴性对照组成正常生长趋势分布。 4．2细胞凋亡检测结果显示，转染48．72小时后，实验组凋亡率为 复测量资料的方差分析，实验组与空白组及阴性对照组之间差异比较均有统计学 意义(Po．05)，而空白组与阴性组经统计学分析无明显差异(PO．05)。 结论： 胞凋亡。 NSCLCNCI-H460细胞转染 关键词：TFPI．2 2 EffectoftransfectionofTFPI—·2 plasmid on cancerNCI—H460cells