运用QF-PCR技术快速诊断胎儿染色体非整倍体异常.pdfVIP

中文摘要 应用QF．PCR技术快速诊断胎儿染色体非整倍体异常 摘 要 目的：染色体病包括染色体数目异常和染色体结构异常，染色体非整 倍体疾病一属于染色体数目异常，包括单体型、三体型、多体型和嵌合体。 临床上常见包括2 8一三体综合征(Edward 1．三体综合征(DownSyndrome)、1 Syndrome)、13．三体综合征(PatauSyndrome)、以及一些性染色体畸变，如 21及X／Y染色体异常占新生儿染色体数目异常的95％，这给家庭和社会 造成沉重负担。此类染色体疾病目前尚无有效的治疗方法，防治重点在于 认真开展产前筛查和产前诊断。目前临床上以染色体核型分析为诊断金标 准，然而该技术有很大的局限性：羊水培养方法程序繁琐，检验周期长； 羊水细胞不易培养，试验结果的可靠性更是很大程度上取决于操作者的经 验和技术。我国能完成稳定、高质量羊水培养的产前诊断中心还很匾乏， 不利于大规模的临床筛查和产前诊断。荧光定量聚合酶链反应技术 (QF．PcR)的发展为染色体非整倍体疾病的快速诊断开辟了新途径，该技 术对非嵌合的非整倍体染色体异常诊断有高度灵敏度和特异性。本研究利 体异常高风险孕妇进行诊断，在此基础上建立常见染色体非整倍体疾病快 速产前诊断技术。 ． 方法：实验标本来自2010年3月至2011年12月河北医科大学第二 医院产前诊断中心，妇产科、儿科门诊及病房。 (1)研究对象：①血清学筛查高危、B超示胎儿发育畸形以及因重大合 并症引产的孕妇(妊娠16．21周)孕妇羊水标本111例；②出生后体征疑似染 色体异常的新生儿外周血4例；③产前诊断中心就诊发育异常的患JLgb周 血3例。 (2)标本采集：孕妇由产科医师在B超引导定位下行羊膜腔穿刺，抽取 体核型分析。 中‘文摘要 (3)DNA提取及定量：标本采集后立即用血液基因组小量提取试剂盒 定量及紫外分光光度计定量，选取其中浓度及纯度较高DNA。 13，1 S1 1， 8，21号及性染色体上的多态性位点D21 计算峰面积比值，并与染色体核型分析结果进行比较。 结果：1l8例标本经荧光定量PCR快速诊断的结果均与染色体核型 分析结果一致。， (1)正常核型113例，杂合体显示荧光强度相同1：1的双峰，而纯合体 显示为单峰，杂合体样本STR位点双等位峰峰面积比分别为D21S11 1．033—1．301，D18S5351．032—1．397，D13S6311．009—1．229，X221．031．1．244， AMXY位点杂合子59例，纯合子54例，即59男，54女。 1．三体综合症样本和1例l8．三体综合症样 (Klinefelter综合征)1例。3例2 本均显示荧光强度约为1：1：1的三等位峰，表示均为标准型。 结论：本研究表明QF．PCR快速产前诊断技术进行染色体非整倍体疾 病的诊断，具有简便、快速、准确等优点，利用我们所选的5对位标可以 同时对13、18、2l以及X／Y五条染色体的数目异常进行诊断，且可以自 动化进行大量样本的检测，适于临床大规模应用。适用于对年龄35岁或 者以上，有较高风险生育染色体异常胎儿的孕妇；经过三联血清筛查显示 结果异常因而具有较高的怀有染色体异常胎儿风险的孕妇；超声显示有染 色体异常表现的患者或者急于知道结果的孕妇；已知双亲之一患有罗伯逊 易位如13／21的胎儿等的产前诊断。该技术的建立对于降低常见染色体疾 病尤其是常见染色体非整倍体疾病的发生率，提高新生儿的质量，优生优 育具有重要意义。 关键词：短串联重复序列；荧光定量PCR；产前诊断；染色体非整 倍体疾病 2 Application of QF—-PCR