保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶合成共轭亚油酸的分析研究.pdfVIP

保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶合成共轭亚油酸研究 摘 要 linoleie 共轭亚油酸(Conjugatede 和t10，c12．CLA两种异构体被认为最具有生物活性，研究发现这两种异构体 具有抗肿瘤、抗粥样动脉硬化、减肥、免疫调节、抗糖尿病等功能。共轭亚油 酸天然存在较少，主要靠人工合成，生物法合成共轭亚油酸具有反应条件温和， 异构体成分单一的优点，可用于食品和药品的添加，而亚油酸异构酶做为合成 中的重要酶近年来成为研究的热点。 本文以保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶为研究对象，首先在产物分析鉴定的 基础上，对保加利亚乳杆菌诱导产酶条件进行了研究，其次研究酶的分离纯化 条件和酶学性质，并对酶的反应体系进行了初步研究。 气质联用色谱和液相色谱检测结果表明：保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶可 1。CLA。 以合成CLA，其中含有两种异构体，主要产物为c9，t1 诱导产酶条件研究表明，在脱脂乳培养基中添加1．5％o(v／v)LA所产酶的共 轭亚油酸转化率最高；温度为36℃，培养36h为较适的培养条件；单独添加0．1 的效果优于培养3至12h后再进行添加。 亚油酸异构酶的最佳提取条件为，以O．7％(m／v)的量添加溶菌酶(30。C， G．100凝胶过滤层析的步骤进行分离纯化后，酶的纯化倍数达到5．17倍，比活 达到电泳纯度，．分子量为42．69KDa。 亚油酸异构酶的酶学特性表明：保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的最适反应 Vmax=4．35mmol／mL·h。 亚油酸异构酶反应体系初步研究表明：保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶在缓 冲液体系下CLA转化率最高；正己烷适合为亚油酸异构酶非水体系反应的介 质；微水体系在正己烷中添加0．6％的缓冲液的反应体系亚油酸异构酶的CLA 转化率较高；在两相体系中正己烷与缓冲液的配比为6：4时，亚油酸异构酶的 CLA转化率较高；乙醇不适合做为均相体系的介质。 关键词：共轭亚油酸亚油酸异构酶保加利亚乳杆菌生物合成 Ⅱ of delbrueckii LionleicAcidIsmeraseLactobacillussubsp linoleicacid bulgaricusBiosynthesizeConjugated ABSTRACT l linoleic aoctadecadienoic Conjugatedacid(CLA)was acid(C8：2)containing bonds．CLAhadtermof and isomers．Two double a con]ugated positionalgeometric ofthe trans-11 andtrans一10eis一1 conferanumberof isomers，cis一9 2，could beneficial effect．Thetwo wereattenedathomeand biological isomers，that abroad， showto fat，immunomodulatio， anti—neoplasm，anti-atherosclerosis，reduce