酶工程综述题.docVIP

1、工业用酶要求酶具有良好的热稳定性，你如何获得热稳定性较高的酶？ 答：⑴从极端热环境中筛选耐热微生物，这些微生物可能含有我们所需要的酶； ⑵对酶分子进行修饰，提高酶分子的热稳定性； ⑶利用定点突变技术改变酶分子的结构，提高酶分子的热稳定性。 ⑷改变酶的催化体系中的介质，采用非水相催化。 ⑸通过酶的定向进化技术提高酶的热稳定性。 2、固定化细胞发酵产酶有哪些优点？ 答： 细胞流失少，使用寿命长，提高设备利用率 细胞密度大，产量大 由于载体的保护，细胞的耐受性增强 便于条件控制，简化操作，易于自动化生产 催化产物少了细胞的干扰，易于分离提纯 由于使用周期延长，使成本降低。 3、如何检查一种酶的制剂是否达到了纯的制剂？试用所学过的知识加以论述。 答：要检测酶的制剂是否达到纯的制剂（即不含杂质及杂质酶），可以有以下几种方法： 层析法：包括纸层析、凝胶层析、柱层析及亲和层析 电泳法：包括SDS凝胶电泳法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法 超离心法：不同的酶分子大小不同，在重力场中具有不同的沉降系数，从而可以通过超离心方法分离目的酶与杂质酶。 免疫反应法：由于酶分子可作为一种抗原物质，而抗原与抗体之间具有专一的亲和力，故可选用目的酶的抗体与酶制剂进行免疫扩散或免疫电泳，从而判断酶的制剂是否纯净。 氨基酸序列分析法：采用特定的化学物质从酶的N末端将氨基酸残基逐个水解下来，最终可获知该酶的氨基酸序列，从而也可以判断出酶制剂是否纯净。 4、酶在很多领域有着广泛的应用，请举四例说明。 答：⑴酶在医药方面的应用：测定血清中谷丙转氨酶的活力用于诊断疾病。 ⑵酶在食品方面的应用：葡萄糖氧化酶用于食品除氧保鲜。 ⑶酶在轻工化工方面的应用：延胡索酸酶用于生产L-苹果酸。 ⑷酶在环境保护方面的应用：利用胆碱酯酶测定有机磷农药污染。 ⑸酶在生物技术方面的应用：DNA聚合酶用于聚合酶链反应。 5、列出酶分子的侧链基团修饰时酶蛋白上可和修饰剂结合的功能团，并指出相应的功能团来自何种氨基酸。 答：（1）赖氨酸的∑氨基 （2）天冬氨酸的β羧基或谷氨酸的γ羧基 （3）半胱氨酸的巯基 ⑷丝氨酸 酪氨酸 苏氨酸上的羟基 ⑸苯丙氨酸和酪氨酸上的苯环 ⑹组氨酸上的咪唑基 ⑺色氨酸上的吲哚基 ⑻精氨酸上的胍基 6、固定化酶和游离酶相比，有何优缺点？ 优点 （1）易将固定化酶和底物、产物分开，产物溶液中没有酶的残留简化了提纯工艺 （2）可以在较长的时间内连续使用 （3）反应过程可以严格控制，有利于工艺自动化 （4）提高了酶的稳定性 （5）较能适于多酶反应 （6）酶的使用效率高 产率高 成本低 缺点 固定化时酶的活力有损失 比较适应于水溶性底物 7、举例说明酶在医学上有广阔的用途。 答: 医药用酶： a.消化用酶：α、β－淀粉酶、胰酶、胰蛋白酶 b.消炎用酶：木瓜蛋白酶、菠萝酶 c.溶纤维酶：尿酸酶、链激酶、溶栓酶 d.肿瘤用酶：L－天冬酰胺酶、谷氨酰胺酶 诊断用酶： a.尿酸酶：用于检测血液和尿液中的尿酸含量 b.甘油激酶：由于检测血液中甘油三酯的含量 检测用酶： a.脱羧酶：由于检测L－谷氨酸 b.虫荧光素酶：用于检测ATP 8、酶发酵生产的前提之一，是根据产酶的需要，选育得到性能优良的微生物。说明优良的产酶微生物应当具备的条件。 答：⑴酶产量高 ⑵产酶稳定性好 ⑶容易培养和管理 ⑷利于酶的分离纯化 ⑸安全可靠、无毒性。 9、层析在实验室和工业化生产中应用很广泛，何为层析？简述常用的三种层析分离方法的原理及适用范围。 答：层析技术是近代生物化学实验中常用的分析方法之一，任何层析过程都是在两个相中进行的。一是固定于支持物上的固定相，另一是流经固定相的流动相，由于样品中各组分理化性质（如溶解度、吸附能力、分子形状、分子所带电荷的性质和数量、分子表面的特殊基团、分子量等）不同，表现出对固定相和流动相的亲和力各不相同。当混杂物通过多孔的支持物时，它们受固定相的阻力和受流动相的推力也不同，各组分移动速度各异并在支持物上集中分布于不同的区域，从而各组分得以分离。常用的层析分离方法吸附层析；分配层析；离子交换层析；凝胶层析；亲和层析。 10、分子筛、离子交换和亲和层析是三种分离、纯化酶蛋白的方法，你如何根据所要分离、纯化的酶制剂的性质选择使用。 参考答案提纲： ⑴、分子筛：以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离；⑵、离子交换：利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力不同而达到分离目的；⑶、亲和层析：利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生