醋酸菌培养条件的优化及醋酸分批发酵.docVIP

醋酸菌培养条件的优化及醋酸分批发酵摘要:目的醋酸菌培养条件的优化与醋酸发酵实验。方法通过正交试验确定最佳培养条件,并在优化条件下进行分批发酵。结果优化培养条件为:葡萄糖10 g/L,酵母膏10 g/L,乙醇10%(v/v),pH 5.5,装量50 mL/500 mL,静置培养5 d。在优化条件下,醋酸产量比用普通产酸培养基提高了36.4%。应用于分批发酵试验产酸较高。结论优化培养条件适合醋酸菌生长与醋酸发酵。 　　关键词:醋杆菌属巴氏醋杆菌;培养条件;正交设计;分批发酵 　　山西老陈醋不仅是具有“绵、酸、香、甜、鲜”独特风味的调味品,还因其富含多种氨基酸、维生素和微量元素而作为保健品得到广泛使用。近年山西醋业发展迅猛,生产规模日渐扩大,生产技术日新月异,促进了山西老陈醋的发展。在食醋生产中,菌种起着至关重要的作用。一株优良的生产菌株能起到提高产量、稳定质量的目的。本实验室从醋醅中分离到一株醋杆菌属巴氏醋杆菌S12,经N+离子注入诱变获得高产突变株SM12-87。对其培养条件进行了优化设计,得出了最佳培养条件。在正交试验对醋酸菌发酵条件掌握的基础上,通过液态分批发酵对优化后的培养条件进行检验。在67 h生产出92.8 g/L的醋酸,乙醇转酸率达到90.08%,极大地缩短了生产周期,减少了成本。 　　1仪器与材料 　　 1.1材料 　　山西老陈醋醋醅(由山西老陈醋集团有限公司提供);醋杆菌属巴氏醋杆菌(Acetobacter past-eurianus)SM12-87(本实验室保存)。 　　1.2主要设备仪器 　　全自动式5 L发酵罐(Edison.N.J.,USA);GC9800型气相色谱仪(上海科创公司);HQL150B型恒温摇床(中科院武汉科学仪器厂)。 1.3培养基 　　1.3.1产酸培养基葡萄糖10 g/L,酵母膏10 g/L,pH 5.5,分装于500 mL三角瓶,每瓶100 mL,121 灭菌20 min,使用前加入7%(v/v)无水乙醇。 　　1.3.2发酵培养基葡萄糖10 g/L,酵母膏10 g/L,磷酸二氢钾0.5 g/L,硫酸镁0.5 g/L,pH 5.5,121灭菌20 min,冷却至60 以下加入10%(v/v)无水乙醇。 　　1.4培养条件优化试验[1] 　　利用正交表L27(313)设计试验,见表1。分析各因素对醋酸产量的影响。 　　表1因素水平表 　　 　　D1,D2,D3分别代表50 mL培养基在500 mL三角瓶中以100 r/min振荡培养,150 r/min振荡培养,静置培养。 　　1.5最佳接种量、培养温度和酒精度的选择 　　醋酸菌SM12-87在优化培养条件下,以不同接种量、培养温度和乙醇含量进行培养,选择最佳接种量、培养温度和酒精度。 1.6优化培养条件的验证试验 　　醋酸菌SM12-87在优化培养条件下培养,以优化前的产酸培养基在30 ,100 r/min摇床培养3 d作为对照。测定总酸度和乙酸乙酯含量。1.7检测方法 　　总酸度的测定:滴定法[2]。 　　乙酸乙酯测定:气相色谱测定法[3]。 　　乙醇转酸率计算公式[4]: 　　 　　还原糖测定:3,5-二硝基水杨酸法[5]。 　　氨基氮测定:甲醛滴定法[6]。 　　1.8醋酸菌SM12-87的分批发酵试验[7] 　　利用优化培养条件配制发酵培养基,用全自动5 L发酵罐进行醋酸分批发酵。2结果与讨论 　　 　　2.1培养条件 　　根据单因子试验,影响醋酸产量的主要因素有:葡萄糖+酵母膏,乙醇含量,pH,溶氧,培养时间。采用L27(313)正交表进行培养条件优化试验。实验结果见表2、表3。 　　表2 以醋酸产量为检测指标的正交试验直观分析表 　　 　　由极差分析的R值可以看出,影响产酸的各因素主次顺序为D E A C B;最佳工艺条件为A2 B1C2 D3 E3。 　　表3以醋酸产量为检测指标的正交试验方差分析表 　　 　　**表示影响高度显著;*表示影响显著 　　F1-0.1(2, 12)=2.81,F1-0.05(2, 12)=3.89, 　　F1-0.01(2, 12)=6.93 　　F1-0.1(4, 12)=2.48,F1-0.05(4, 12)=3.26, F1-0.01(4, 12)=5.41 　　由方差分析表可见,D对醋酸菌的产酸影响高度显著,A、E对醋酸菌的产酸影响显著, A与B、A与C的交互作用对产酸有一定影响,A与D的交互作用对产酸影响不显著。从方差分析可知,溶氧条件D3对产酸影响非常显著。由此可见,醋酸菌虽然是好氧菌,但过高的溶氧对醋酸菌的生长和产酸都是不利的。 　　由直观分析表和方差分析表可知最佳工艺条件为:葡萄糖10 g/