细胞热力学研究方法的2.pptVIP

四、显微操作技术micromanipulation technique;显微操作仪;第二节 细胞组分的分析方法;一、离心技术;（一）差速离心 Differential centrifugation;差速离心;Low speed;Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation;（二）密度梯度离心;二、 细胞内核酸、蛋白质、酶、糖 与脂类等的显示方法; 显示方法;Schiff反应;三、特异蛋白抗原的定位与定性;（一）免疫荧光法（immunofluorescent technique）：快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 如异硫氰酸荧光素、罗丹明等。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;（二） 蛋白电泳(SDS) 与免疫印迹反应(Western-Blot) ; SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）;十二烷基磺酸钠;蛋白质样品;（三）免疫电镜技术： ?免疫铁蛋白技术：铁蛋白提取繁琐，分子量大，不易进 入细胞。 ?免疫酶标技术：反应没有特??性，不能进行感受部位的 点对点对应。 ?免疫胶体金技术：胶体金是直径1-100mμm的金颗粒分 散在水中形成的金溶胶。特异性强，容易识别。分辨 率高。 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分 泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的 定位等;免疫胶体金技术;四、细胞内特异核酸的定位与定性;原位杂交技术：用标记的核酸探针通过分子杂交,经放射自显影或非放射检测体系，确定特殊核苷酸序列在染色体或细胞中位置的方法。在组织、细胞、间期核及染色体上对核苷酸序列进行定位和相对定量研究的一种手段。 分RNA原位杂交和染色体原位杂交两大类。最初是使用放射性DNA探针，后来又发明了免疫探针法。 ?光镜水平的原位杂交技术：同位素标记或荧光素标记 的探针 ? 电镜水平的原位杂交技术 ：生物素标记的探针与抗生 物素抗体 相连的胶体金标记结合。;1、RNA原位杂交;;（二）Southern杂交;分子杂交实验;（三）PCR 技术;待扩增的DNA片段+dNTP+Tris·HCl缓冲液 +两条引物+ Taq DNA聚合酶 +Mg 2+;PCR;五、放射自显影术;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;放射自显影照片