一串红蔗糖酶的分离纯化、部分性质及功能基团分析研究和固定化条件优化.pdf

两南人。学硕+学何论文 摘要 一串红蔗糖酶的分离纯化、部分性质与功能 基团研究和固定化条件优化 生物化学与分子生物学专业研究生 杜泓璇 指导教师唐云明教授 捅 斐 植物外，类似的活性也在动物的消化液中发现，从链孢霉提纯获得的酶除作用蔗 糖外，还可作用具有13一呋喃果糖苷键的物质。在植物生长发育和代谢过程中，蔗 糖酶分解蔗糖成己糖，为植物的成长和发育提供能源和碳源，是植物碳氮代谢中 的关键。蔗糖酶在植物的运输贮藏、碳水化合物代谢中发挥主要作用。随着世界 工业化与现代化的生产，越来越多的生物大分子被应用到社会的各项生产中，蔗 糖酶也在食品加工等产业显示出了强大的功效。 一串红又名爆仗红(Salviasplendens 鼠尾草属(Salvia)。一串红花色鲜艳，花期较长，尤其晚秋花色更为艳丽，是 “五一“十一”用花的重要材料。它的全株均可入药，有凉血消肿功效，并且 能吸收空气中一定浓度有毒气体，将氮氧化物转化为植物细胞的蛋白质，是人类 美化城市、健康生活不可缺少的一部分。 随着生物科学的发展，植物经济价值飞速提升的同时，其药用价值，工业价 值也越来也受到人们的关注。一串红就是其中一例。本研究一方面可以为一串红 的相关研究提供一定的理论基础，另一方面也期望一串红的利用价值得到更大程 度的开发，提高其经济价值。 本论文主要对一串红幼叶片蔗糖酶进行分离纯化、理化性质研究、酶促动力 学性质研究、抑制剂以及功能基团的化学修饰研究和固定化等方面的研究，结果 如下： 1．蔗糖酶的分离纯化 离子交换层析、SephacrylS-300凝胶过滤层析等方法获得纯化的蔗糖酶，以 为22．21％。 两南人学硕十学何论文 摘要 2．蔗糖酶的理化性质研究 研究表明，蔗糖酶全分子量为130KD，亚基分子量为65．01KD，表明蔗糖酶 是由两个相同的亚基组成。酶促动力学研究表明，蔗糖酶的最适pH值在5．0左右， 稳定，米氏常数l(IIl值为55．6mmol／L。 3．金属离子及相关试剂的影响 Cu2+、Mn2+对 金属离子中对蔗糖酶的抑制能力较强的是Ba2+、A。矿、Pb“； 一串红的蔗糖酶有激活作用。在实验的几种化学试剂中，双氧水的抑制作用最强， 其次是EDTA，尿素和抗坏血酸对活性的影响不显著。 4．蔗糖酶的化学修饰 酶的活力影响不大。 5．蔗糖酶的固定化 交联法制备固定化蔗糖酶的结果，得到最佳的实验方案为：20％明胶载体与酶液 然后放入5％浓度的戊二醛中交联1个h。反应最佳条件为pH5．0，55℃。此方法 得到的固定化蔗糖酶机械性好，在高pH，高温下都维持固态，操作稳定性与储存 稳定性均增加明显。 关键词蔗糖酶分离纯化功能基团固定化 U O andMolecular Biology Discipline：Biochemistry and Direction：EnzymologyEnzymeEngineering Yunming Supervisor：Prof．Tang xuan MasterCandidate：Du Hong