实验4-血清甘油三酯含量测定.ppt

* 实验26 血清甘油三酯含量测定 Assay of Triglyceride content 生物化学与分子生物学系 陈园园 实 验 目 的 了解血清甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义 掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法 甘油三酯 KOH 60-70℃ 20min 钾皂 甘油 + + HIO4 + NH4+ 甲醛 乙酰丙酮 3,5-二乙酰-1,4二氢-2,6 二甲基吡啶 （黄色带荧光） 甘油 甲醛 皂化 氧化 显色 3 2 实 验 原 理 实 验 步 骤 取3（或4）只小试管，依次加入蒸馏水、标准液、样品， 抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇10min，静置10min分层 注意：试管必须干燥 吸取上层液体0.5ml，加入对应的3 （或4）只大试管中， 加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀，65℃水浴5min 注意：吸上层液时，务必当心，绝对不可吸入下层液体 （分光光度计预热） 加入氧化试剂，充分混匀后， 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀，65℃水浴15min 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度 抽提 皂化 氧化显色 比色 拉杆，0-4档 样品池 读数 波长 毛面 1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光从光面通过 2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积 3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面 比色杯的使用 分光光度计的使用 1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100” 3. 拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00” 4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度 光面 Lambert-Beer 定律 正常参考值为0.30~1.7mmol/L mg/ml mmol/L 国际单位 mg/ml ————————— ×1000 摩尔质量g/mol (885) 实 验 结 果 A1 c1 m1 标准管法 —— = —— = —— （终体积相同时） A2 c2 m2 A样品 ——— × m标准品 A标准品 样品TG浓度 = ———————— V样品 A样品 ——— × 1mg/ml ×0.2ml A标准品 = ———————————— 0.2ml 注 意 事 项 抽提时摇匀静置，待完全分层后才能吸取上层液， 吸取上层液时不能吸入下层液； 实验完成后，试管和比色杯必须用皂粉洗干净， 不能有油污，将水甩干，倒置晾干； 枪头必须清洗干净，甩干 选用小试管时试管口径不能太细； 试管使用时必须要干燥； 血脂：血甘油三酯、血胆固醇 临 床 应 用 餐后甘油三酯会增高，检查时一定要空腹抽血 饮酒可引起血清甘油三酯浓度急性、短暂性升高， 抽血前几天禁止饮酒 正常人血清甘油三酯水平有随年龄增高的趋势 血清甘油三酯水平升高多见于糖尿病、肾病综合征、 急性胰腺炎、原发性高甘油三酯血症及 动脉粥样硬化等 * * *