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2017-11-01 发布于四川
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实验胡萝卜愈伤组织的继代培养.ppt

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实验胡萝卜愈伤组织的继代培养

实验2.4 胡萝卜愈伤组织的继代培养 1. 实验目的通过本次实验，使同学熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术；设计和配制胡萝卜细胞悬浮培养的培养基。 2.实验内容（1）胡萝卜愈伤组织的继代培养（2）胡萝卜细胞悬浮培养培养基的配制 3. 主要实验用具酒精棉球、小块纱布、已灭菌培养皿和滤纸、枪状镊子、眼科手术剪、手术刀、酒精灯、 100ml三角瓶、500或1000ml搪瓷杯、50ml量筒、1ml、2ml、5ml、10ml吸管、精密pH试纸（5.4~7.0）、封口膜、橡皮圈、药勺、称量纸等。 4.药品和试剂愈伤组织继代培养基、75％酒精、MS培养基和常用试剂母液、蒸馏水。 5.实验材料处于脱分化进程中的外植体 6.实验流程（1）胡萝卜愈伤组织的继代培养 ①准备工作接种室的清洁和消毒；超净工作台的开机和消毒；剪刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；实验材料的准备（选择装有无污染的已分化出愈伤组织的外植体的三角瓶摆放于净工作台上） ②愈伤组织继代培养将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污染的外植体上产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织继代诱导培养基上，放置在25 ℃全黑暗条件下进行愈伤组织的增值培养，以获得足够的愈伤组织，作为后续实验的实验材料。（2）胡萝卜细胞悬浮培养培养基的配制配方：MS基本培养基 + 2.0mg/L NAA + 0.1mg/L6-BA + 200mg/L水解酪蛋白 + 3％蔗糖配制流程：配制调节pH值封口包扎灭菌 * *