蛋白激酶G在钙化血管中的作用.pdfVIP

中文摘要 蛋白激酶G在钙化血管中的作用 摘 要 目的：骨、牙齿之外的非骨性组织发生钙化，伴或不伴 组织坏死或损伤，均称为异位钙化。心血管系统的异位钙 化常见于老年人及高血压、动脉粥样硬化、糖尿病和慢性 肾病患者，包括动脉内膜(动脉粥样硬化相关钙化)、动脉 中层(Mo“nckeberg’S 在哪个部位，都会引起血流动力学和机械力学的改变，使 动脉管壁僵硬，收缩压升高、舒张压降低，脉压差增大， 冠状动脉灌注降低，最终将导致左室肥大、心肌缺血和心 律失常，并增加卒中和猝死的危险。血管钙化是动脉粥样 硬化、糖尿病、肾病、衰老、高血压等多种疾病的病理生 理基础，是心血管疾病的主要危险因子，出现在80％血管 损伤和90％冠脉疾病中。较无钙化者，任何程度的冠状 动脉钙化整体相对危险度为4．3，3～5年冠心病事件(心肌 梗死或心源性死亡)增加4倍。深入研究血管钙化的发病机 制，预防、延缓或逆转血管钙化的发生，具有重要的临床 立、、， 思义。 既往认为血管钙化是过饱和的钙、磷在血管壁的被动 沉积，近年证实是由细胞和分子参与的、类似于骨形成的 氨酸蛋白磷酸酶家族成员，分类上属于PP2B家族，是唯一 受Ca2+／钙调素调节的磷蛋白磷酸酶。CaN主要表达于细胞 浆中，组织分布广泛，通过使底物活化T细胞核因子 中文摘要 factorofactivatedTcell (Nuclear s。NFATs)去磷酸化和核内 转位，激活下游基因转录，参与多种细胞功能调节。环鸟 kinase，PKG) 苷酸依赖的蛋白激酶(cGMP．dependentprotein 是广泛存在于真核细胞内的一种丝／苏氨酸蛋白激酶，存在 于多种组织细胞，是重要的信号分子NO的下游底物，能够 在多种水平调节Ca2+水平，从而参与多种细胞功能调节。 近年研究己证实CaN能够抑制培养血管平滑肌细胞 I的表达，而CaN在钙化血管中与 (VSMCs)胞浆内PKG PKG的关系目前国内外尚未见有报道。 本试验采用华法令和维生素D，建立大鼠血管钙化模 型，测定主动脉CaNmRNA、蛋白质的表达与活性及PKG mRNA、蛋白质的表达，并观察CaN对PKG表达的影响， 初步探讨CaN及PKG对血管钙化的调节作用，为血管钙 化的临床防治提供新的思路。 方法：4w 为3组，每组12只。A组：对照组；B组：钙化组；C 组：环孢霉素A组；实验第1—8天，各组均给予维生素 A 盐水腹腔注射。第3天开始，B、C组另给予维生素D3 对照组在相同时间给予等量生理盐水皮下注射。实验第9 天，所有动物麻醉后处死。开胸，暴露出心脏，分离胸主 动脉，并向下剖开腹部，分离出腹主动脉，从主动脉根部 至腹主动脉分叉处剪下主动脉。取材后每组各取6只以免 中文摘要 疫组化法测定CaNBl蛋白及PKGI。蛋白，原位杂交法测 定CaNAamRNA及PKG 磷酸酶(ALP)活性测定。将免疫组织化学和原位杂交结果 Plus图象分析软件，分别计算各组主动脉 应用Image．Pro 组织相同面积内阳性细胞的累积光密度值(integratedoptic SPSS13．0统计软件，首先对计量资料进行正态性检验及 方差齐性检验，组间资料比较应用单因素方差分析，两两 比较应用LSD．t检验，p0．05即有统计学意义。 结果：(1)HE染色结果示对照组大鼠主动脉壁结构完 孢霉素A组大鼠主动脉中层VSMCs排列紊乱，弹力纤维 迂曲断裂。VonKossa染色示钙化组大鼠主动脉中层弹性纤 维间有大量黑色颗粒沉积；环孢霉素A组大鼠主动脉中层 弹性纤维间亦可见黑色颗粒沉积；对照组未见明显黑色颗 粒沉积。(2)免疫组织化学结果显示三组大鼠主动脉可见 I 一定量CaNBl蛋白及PKG d蛋白表达，主要位于胞浆内。