纤维素酶解速度的可视化表征与限制因素分析-生物化学与生物物理进展.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2015, 42(3): 201~210 维素酶解速度的可视化表征与限制因素分析* 孟凡辉 蒋绪恺 刘 琳 张怀强 高培基 王禄山** ( 山东大学微生物技术国家重点实验室，济南250100) 摘要 纤维素酶解效率是木质纤维素高效生物 化的限制瓶颈，利用原子力显微镜(atomic force microscope ，AFM)可以在水 相中原位可视化表征纤维素酶分子运动行为，分析单个酶分子的运动速度及其影响因素．研究发现，高效降解结晶纤维素酶 分子仅结合于特 结晶表面上的特 位点上，通过单方向运动完成逐层降解，过量酶分子结合于特 表面上会导 持续性运 动 “塞车”现象．结晶微纤丝的降解不仅取决于酶分子运动速度及其糖苷键断裂效率，更取决于酶分子可及底物的晶面大小 及其晶面氢键解聚程度．以新结合模式、新运动模式或新组织模式的纤维素酶系或复合体应是纤维素酶研究的重点方向． 关键词 木质纤维素，纤维素酶，原子力显微镜，降解效率，限制因素 学科分类号 Q6-33 DOI: 10.16476/j.pibb.20 14.0220 木质纤维素占绿色植物干重的35% 50%[1]， 针对整个反应系统的均值进行处理．单从酶反应动 [7] 它是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物， 力学的研究，难以提供酶解过程的全部动态信息 , [2] 同时又是自然界中数量最大的可再生性资源 ，其 这样就难以认识木质纤维素降解低效的真正原因是 合成与降解过程是自然界碳素循环的中心环节．通 由于酶量的不足，还是酶与底物的不匹配，或者是 过酶学技术可以将木质纤维素降解 化形成可溶性 两者因素都存在而导 的．先进的超微可视化技术 糖及生物化学产品，因此这对于解决目前世界能源 可以在纳米尺度上观察单个酶分子的运动，表征其 危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的 在纤维素底物表面上的运动行为及相关属性，这就 意义[3] ．但天然木质纤维素酶解 化的效率较低， 为人们打开了新的视野，开拓了新的研究方向；超 限制其生物 化的大规模推广与应用． 微可视化技术中成像可行性、酶分子动态行为持续 木质纤维素主要存在于绿色植物的细胞壁中， 跟踪观察等技术研究已经突破，这样利用超微可视 它是陆生植物离开水生环境后形成的支持与保护屏 化技术手段就可以分析纤维素酶分子的降解行为及 障，这是长期进化过程形成的，人们现将植物抵抗 影响速率的限 性因素[8] ． 微生物及酶降解的各种特性通称为“生物质的抗降 在高时空分辨率下实时观察生物大分子的分子 [4] 解屏障(biomass recalcitrance)” ．它由不同解剖层 动态行为，需要显微分析技术满足以下条件：a． 次、不同组织结构、不同微纤丝超分子结构层次及 不需要任何标记，在液相中直接成像观察；b ．降 其不同聚合物中不同化学结构单元等组成．多种化 低对样品的损坏；c．高空间分辨率；d．高时间分 [9] 学成分和多层次超分子复杂结构的形成，导致了化 辨率．从而还原生物大分子反应过程的真实性 ． 学反应的不均一性和纤维素酶种类的多样性及酶解 相对于其他可视化技术手段，原子力显微镜 反应过程的复杂性[5-6] ．细胞壁的化学组成和超微 结构研究的深入开展，将可帮助热化学或生物 化 * 国家自然科学基金3 1070063)和山东省国际科技合作