植物逆境生理第九章高等植物多胺和脯氨酸代谢及其与植物抗逆性的关系.ppt

需进一步研究。Billard(1997)用3,4-二氯苯基-1,1-二甲基尿素处理四季萝卜子叶，发现Pro积累不受影响，而该试剂强烈抑制光合电子流和叶绿体分化，说明Orn途径与叶绿体无关。 从上述可以看出，在个体发育的早期阶段，Orn→Pro途径在Pro合成中起重要作用，此时异养型营养占优势，我们称之为异化型；而Glu作为Pro合成的起始底物显然存在于个体发育的整个阶段，特别是渗透胁迫处理的植物细胞Glu是主要的合成前体，当细胞内Ｎ素水平过高时，也诱导Orn途径的运行，盐胁迫对Orn途径的调节则因植物种类不同而异。最近发现在菊芋组织中，同Glu相比，Arg和Orn是更重要的Pro合成前体，可见不同植物、不同组织、不同生理条件下两条途径对Pro积累的贡献大小存在差异。 二、胁迫条件下Pro降解代谢及相关酶调节 胁迫条件下Pro大量积累的第二个原因是氧化降解的限制。David(1986)在研究水分胁迫下西红柿悬浮培养细胞中Ｎ代谢时发现，Pro合成速度上升了10倍，而结果产生300倍Pro积累，进一步试验发现胁迫处理的细胞系中合成的Pro降解速度下降了6倍，可见氧化降解受限制对Pro库的上升具有重要意义。植物体内Pro降解代谢基本上是合成代谢的逆过程，如图9-7。由于催化Pro合成的酶位于胞质或叶绿体中，而氧化降解酶定位于线粒体中，从而能避免Glu和Pro间的无效循环，与此类似，在基因组中与这些对应的基因也分布于 不同的基因位点上，因此生物合成和分解的酶基因对胁迫因子的敏感程度不同。Pro到Glu的氧化途径是在两个酶催化下进行的，一个为Pro脱氢酶(ProDH；EC1.5.99.8)，一个为p5c脱氢酶(p5cDH；EC1.5.1.12)。在检测渗透胁迫处理的玉米线粒体ProDH和p5cDH的专一性时，发现ProDH活性强烈降低，而p5cDH不受影响，说明ProDH催化了胁迫下Pro降解反应的限速步骤。由于ProDH定位于线粒体内膜近基质侧，因此早期纯化工作较困难，John(1991)曾报道从玉米黄化幼苗中分离了ProDH，初步鉴定分子量为50 KD，酶活性受Cl-抑制。最近有三个试验室几乎同时从拟南芥中成功分离了ProDH cDNA。Kiyosue(1996)利用不同筛选方法从脱水1 h 的植物cDNA文库中提取了ProDH cDNA。Verbruggen和Peng(1996)等根据来自酵母和果蝇的ProDH氨基酸顺序发现在拟南芥酶蛋白氨基酸顺序资料库中有一个可逆的ProDH序列，并分离了cDNA。拟南芥中ProDH蛋白的氨基酸序列中含有一个假定的信号，为合成的酶蛋白进入线粒体的标志，免疫检测技术进一步证明基因产物位于线粒体组分中。ProDH基因表达除受渗透胁迫抑制外，还受外源Pro诱导，植物脱水引起渗透胁迫并导致细胞内Pro含量上升，形成的Pro在渗透胁迫开始数小时不能诱导ProDH基因的表达，这是由于渗透胁迫的抑制作用，当植物复水时，该基因的表达开始受 Pro诱导，则是由于渗透胁迫的解除。最近Yoshiba(1997)证明ProDH在转录水平上被调节，已归纳如图9-8。 p5cDH基因至今尚未被分离，最近p5cDH酶蛋白已从培养的马铃薯细胞中得到纯化，不久将对基因进行克隆。从培养的马铃薯细胞中分离的p5cDH的分子量为60 KD的四聚体，可以NAD+或NADP+为底物。对NAD+亲和力大于后者，该酶受Ｃl-显著抑制，尽管Rayapati(1991)报道在玉米中p5cDH对渗透胁迫不敏感，但笔者分析该酶对Ｃl-的敏感性将有利于离子和渗透胁迫条件下植物细胞降解p5c的氧化反应，从而保证Pro的大量积累。 三、Pro与多胺代谢的相互关系 植物体中多胺的合成是以Arg、Orn为前体，可以推测多胺和Pro的合成存在底物竞争，此外二者亦可竞争Glu作为各自起始底物。细胞内Glu可以通过GSA、p5c直接转变成Pro，也可经过Ｎ-乙酰-Glu、Ｎ-乙酰-Orn、Orn、Arg而间接生成Put。胁迫条件下细胞内Ｎ素代谢紊乱，造成含Ｎ化合物积累，特别是Pro、多胺、季铵盐类是积累最多的化合物。但用ABA处理水化的大麦叶片，发现ABA可诱导Pro积累，而游离多胺含量并未发生变化，没有发现Pro和多胺积累的竞争关系。相反Frederik(1993)证明过度水化导致Ｎ代谢紊乱的甜菜愈伤组织中， Pro通过降解生成Orn 促进了多胺的合成。过度水化的愈伤组织中大量积累Pro，多胺含量随之上升，特别是Spd、Put，其中Spd占游离多胺总量的50%。利用多胺合成关键酶ADC、ODC各自专一性不可逆抑制剂DFMA(二氟甲基精氨酸)、DFMO(二氟甲基鸟氨酸)处理，证明甜菜愈伤组织中A