醇提红曲对去势骨质疏松模型大鼠影响和其作用机制探讨.pdfVIP

山西医科大学硕士论文 第二部分、利用重复测量设计以去势大鼠模型分析红曲对大鼠 BMD、体重的作用趋势及影响 材料与方法 1．实验药物及试剂 降钙素I扳161(商品名密盖息)北京诺华制药有限公司，药品注册证号： 红曲醇提液山西医科大学药学院提供； 大鼠OPG定量EILISA试剂盒上海麦莎生物科技有限公司提供； 碱性磷酸酶【1。71测定试剂盒南京建成生物工程研究所提供。 2．实验仪器 紫外可见分光光度仪型号SP-755PC上海光谱仪器有限公司生产。 3．实验动物 严格控制在室温18．22℃、湿度45-65％。 4．动物分组及造模 口，无菌条件下切开皮肤、皮下组织，B、C和D组切除卵巢，A组只切除卵巢周围少量脂肪 2n。 组织，逐层缝合。术后连续3天肌注青霉素注射液，均给普通饲料，自由饮食m 5．实验方法 5．1给药：按重复测量两因素多水平分析方法瞄’捌，处理因素为A因素，测量时间为B因素。 术后1周给药， B组、C组、D组分别予以红曲醇提液灌胃、降钙素皮下注射、生理盐水灌 胃，连续给药12周(用药量相当于成人每天每公斤体重用量的20倍)，A组无特殊处理。于1 周末、6周末、12周末重复测量大鼠左侧股骨骨密度及体重，根据体重变化调整用药量。骨 密度扫描的部位包括股骨和胫骨上端，扫描前水合氯醛腹腔注射，麻醉后使大鼠处于俯卧位， 后肢维持在外旋位，股骨与胫骨呈45。角【刎。扫描重复3次，每次重置大鼠。 5．2大鼠OPG定量测定陋l 温离心取血清；采用ELISA-竞争法。 ． 5．2．1检测程序 匀后用加样器吸出100ul，移至第二孔。如此反复作对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸 出弃去100ul，使之体积均为100ul。第八孔为空白对照。 山西医科大学硕士论文 加样：待测品孔每孔各加入待测样品100ul。 将反应板充分混匀后置37℃120分钟。 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。 每孔中加入第一抗体工作液50ul。 将反应板置37℃60分钟。 洗板：同前。 每孔加酶标抗体工作液100ul。 将反应板置37℃60分钟。 洗板：同前。 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗处反应5．10分钟。 每孔加一滴终止液混匀。 在492nm处测吸光值。 结果计算与判断： 所有OD值都应减去空白值后再行计算。 根据样品OD值在该曲线图上查出相应OPG含量。 5．3大鼠血清A测定 5．3．1试剂配置 O．1mg／ml酚标准应用液的配制：1．1mg,／ml的酚标准贮备液：蒸馏水=1：10稀释。 5．3．2操作表 山西医科大学硕士论文 立即混匀，520nto光径比色，空白管调零，测各管吸光度。 5．3．3单位定义 lOOml血清在37℃与基质作用15分钟产生lmg酚为1个金氏单位。 5．3．4计算公式 5．4骨切片的制备【冽 剥离左后肢股骨，去除附着的软组织，立即放入10％福尔马林中固定24小时，脱钙，石 蜡包埋，常规组织学切片，HE染色，光镜下观察骨小梁形态结构。 ‘ 6．统计学分析 应用SAS9．0统计软件，计数资料采用数据以i±s表示；骨密度和体重资料利用重复测量 料之间的相关性分析采用直线相关分析。 结果 1．一般状态变化 各组大鼠切除卵巢6周后逐渐出现不同程度的活动减少、挨挤喜卧、反应迟钝，或易激 惹、拱背、竖毛、毛色变黄等现象，模型组最为明显，红曲组症状较轻，各组去卵巢大鼠的 摄食、饮水量均较假手术组增多。表明：中药红曲可明显改善去卵巢大鼠的一般状态，减轻 去卵巢引起的萎靡、虚弱、皮毛憔悴等症状。 2．骨密度重复测量结果：