评价两种低温等离子体对粪肠球菌生物膜作用体外实验探究.docVIP

评价两种低温等离子体对粪肠球菌生物膜作用体外实验探究[摘要] 目的 比较辉光放电和介质阻挡放电两种低温等离子体装置产生的大气压低温等离子体对根管内粪肠球菌生物膜的杀菌效果。方法 在120颗离体牙的根管内部培养粪肠球菌生物膜，培养时间为7 d。将离体牙随机分为12个组，其中，10组分别接受介质阻挡放电和辉光放电这两种大气压低温等离子体装置处理离体牙根管，每种装置各处理5组，每组处理时间分别为2、4、6、8、10 min；另外2组为两种不同装置的单纯气体对照组。采用菌落形成单位计数法比较两种装置对根管内生物膜的杀菌效果，通过光谱测量仪分析两种装置的等离子体活性成分。结果 介质阻挡放电装置比辉光放电装置对根管内粪肠球菌生物膜的杀菌效果更好，不同时间段二者存活的细菌数量均有统计学差异（P0.05），而且随着处理时间延长优势更加明显。发射光谱显示两种装置的低温等离子体活 性物质成分一致，但激发态Ar原子的群峰总体上表现为介质阻挡放电装置是辉光放电装置的2倍。结论 介质阻挡放电装置产生的低温等离子体杀灭根管内粪肠球菌生物膜更具优势。 [关键词] 低温等离子体； 粪肠球菌； 生物膜； 根管； 杀菌 [中图分类号] R 780.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.02.020 细菌感染是顽固性根尖周炎和根管治疗失败最常见的因素，其中最常分离的菌株是粪肠球菌[1]。粪 肠球菌可以通过其分泌的蛋白酶（丝氨酸蛋白酶、白明胶酶、胶原结合蛋白）的作用来黏附在根管表面并进入牙本质小管内，从而更加耐受临床上常规的治疗手段[2]。氢氧化钙作为常规根管封药效果确定，但粪肠球菌在这种碱性药物环境中仍然可以顽强生存[3]。另外由于根管系统自身结构的复杂性，残存于侧支根管、副根管中的粪肠球菌难以被常规根管治疗中的机械和化学方法彻底清除。近年来，大气压低温等离子体在医学中的应用越来越广泛，如快速凝血[4]、基因转染[5]、牙齿美白[6]、杀菌[7]、诱导肿瘤细胞凋亡[8]等。研究显示其对于根管内的细菌感染也有确 定作用，但多局限于根管内游离菌或模拟根管内生物膜的研究[9-10]。对于不同发生装置的低温等离子体 根管杀菌效果少有研究。 大气压低温等离子体的发生装置及原理有4种，常用的为介质阻挡放电和辉光放电。介质阻挡放电是将绝缘介质插入放电空间的一种气体中放电，介质可以覆盖在电极上或悬挂在放电空间里，当在电极上施加足够高的交流电压时，即使在大气压下电极间的气体也会被击穿而产生放电。辉光放电是在两电极之间直接激发气体放电。辉光放电的电学特征为单脉冲，而介质阻挡放电则为大量细微的快脉冲放电通道所构成的放电。本研究使用这两种不同的装置，分别对离体牙根管内的粪肠球菌生物膜进行处理，观察其杀菌效果及与时间因素的关系，并对相关机制进行初步探索。 1 材料和方法 1.1 粪肠球菌的培养 粪肠球菌菌种（ATCC29212）保存于-80 ℃冰箱，使用接种环挑取菌液进行划线培养。36 h后挑取单克隆，于1 mL培养基中37 ℃静置24 h，使得细菌浓度达到每毫升1.0×107个菌落形成单位（colony forming unit，CFU）。 1.2 离体牙预备 选取根尖发育完善、根面完整的单根管离体牙共120颗，自釉牙骨质界下截除牙冠部分，保证从根尖至断面的距离为10 mm。拔髓针拔除牙髓，15号锉通畅根管到解剖根尖孔，确定工作长度（自解剖 根尖孔至牙根断面的长度减去0.5 mm），使用15～40号手用镍钛锉（Mani公司，日本）按逐步后退法进行根管预备，预备过程中每更换1次器械均用5.25%次氯酸钠（NaClO）2 mL冲洗根管；预备结束后17%乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）浸泡根管2 min，超声振荡；最后5.25%NaClO浸泡根管2 min，超声振荡。Clearfill AP-X光固化树脂（Ku- raray公司，日本）封闭根尖孔。所有样本高温高压灭菌（121 ℃，20 min）后放入无菌生理盐水中4 ℃冰箱储存备用。 1.3 根管内粪肠球菌生物膜的培养 将预备好的牙根样本放入含有1 mL新鲜脑心浸液肉汤（brain heart infusion broth，BHI）培养基的EP管中，然后加入100 μL含有1.0×107 CFU·mL-1粪肠球菌的菌液，37 ℃厌氧培养，48 h换1 mL新鲜的培养基，共培养7 d。 1.4 大气压低温等离子体装置处理离体牙根管 将培养7 d的含有粪肠球菌生物膜的120颗离体牙样本随机分为12个组，每组10颗。其中，10组分别接受介