月华胶囊对结核小鼠肝脏病理学影响实验观察.docVIP

月华胶囊对结核小鼠肝脏病理学影响实验观察【摘要】目的:观察月华胶囊对结核小鼠肝的病理学影响。方法:采用尾静脉注射H37RV结核杆菌造模，随机分为模型组、西药组、月华胶囊低剂量组、中剂量组、高剂量组、月华胶囊中剂量与西药联合组，建立空白对照组；光镜下观察肝的病理变化。结果:与模型组比较，其余各组肝脏病理改变均较模型组轻；月华胶囊3个剂量组比较，中剂量组肝病变较轻；与单用西药或月华胶囊的各剂量组比较，联合用药组肝病变最轻。结论:月华胶囊能减轻结核杆菌对小鼠肝的病理损害，中剂量组效果优于低、高剂量组，所有用药组中联合用药组优于其它单独用药组。 【关键词】月华胶囊；结核杆菌；肝；小鼠；病理学 【中图分类号】R285【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0103-01 20世纪90年代初，全球结核病出现新的趋势，无论是发达国家还是发展中国家，结核病疫情又呈上升之势，以至结核病在新世纪中仍然是严重危害人类健康的主要传染病，已构成重大的公共卫生和社会问题［1］。西药联合化疗方案仍为抗结核的主流，而结核菌的耐药及抗结核药物对人体的毒副作用已成了化学治疗的两个明显弱点。月华胶囊为清代医家程钟龄所制的传统抗痨名方月华丸改革剂型而成，动物实验研究表明，月华胶囊能通过改变Ｔ淋巴细胞亚群CD4+、CD4+／CD8+及其TH1型细胞因子IFN-γ、IL-2、TH2型细胞因子IL-10和TNF-α的变化进行免疫调控，起到对耐多药结核鼠的免疫治疗作用［2］，现将其对结核杆菌感染小鼠肝脏的病理学影响结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料:（1）动物：健康NIH小鼠140只，清洁级，体质量（20±2）g，雌雄各半，由湖南中医药大学动物实验中心提供，合格证号为：医动字第20-001号。（2）菌液：①细菌来源 美国实验菌种保护中心(ATCC)，型号为H 37Rv，编号27294。②制备 菌株在改良罗氏培养基上培养3周，挑取生长良好的菌落加入有玻璃珠的试管中磨菌，加入含0.05％tween-80的灭菌生理盐水轻轻摇动，调制成浓度为1×105 CFU/mL的菌悬液。（3）药物： ①月华胶囊 由天冬、麦冬、沙参、生地、熟地、阿胶、山药、茯苓、百部等组成，经湖南中医药大学第一附属医院制剂科制备，0.8g/粒（相当于不含辅料的浸膏粉），成人2.4g/d ，实验时将胶囊去壳，内容物用40℃蒸溜水溶解，并配制成胶囊内容物含量分别为相当于临床等效剂量的28 mg/mL、56mg/mL、112mg/mL的低、中、高3个剂量。 ②化疗药 化疗方案为RHZ，异烟肼（H）由沈阳红旗制药有限公司生产，批号：120001006， 0.1g/片，0.3g/d；利福平（R）由沈阳红旗制药有限公司生产，批号：120002017，0.15g/片，0.45g/d；吡嗪酰胺（Z）由沈阳红旗制药有限公司生产，批号：120001032，1.5g/片，1.5g/d 。每次用蒸溜水配制成化疗药物含量为13mg/mL的溶液供小白鼠灌胃用。（4）仪器及场地： ①仪器 江南双目光学显微镜（江南光学仪器厂）；LKB－VI型超薄切片机（瑞典）；DM－LB2莱卡生物摄影显微镜（德国）。 ②场地 实验场地与一般实验室隔离，阳光充足，通风良好，温度控制在（19±2）℃，相对湿度40~70%，室内安装有排风扇、紫外线消毒灯。 1.2 方法：（1）动物造模：取140只小鼠，雌雄各半。先进行体重分层，按随机原则抽取雌雄各6只小鼠作为正常组后，余下的小鼠全部以尾静脉注射0.2mL 浓度为1×105CFU/mL的结核菌液造模，穿刺部位压迫止血2min。（2）动物分组：造模后将小鼠随机分为模型组、西药化疗组、月华胶囊低剂量组、月华胶囊中剂量组、月华胶囊高剂量组、月华胶囊联合西药组（以下分别简称模型组，西药组，低、中、高剂量组和联合组），共7组，每组12只，雌雄各半，分笼饲养，造模小鼠与正常组小鼠隔离饲养。（3） 动物给药：①给药剂量：以60kg成人，20g小鼠按体表面积进行换算，西药组（0.325g/kg.d）、低剂量组（0.7g/kg.d）、中剂量组（1.4g/kg.d）、高剂量组（2.8g/kg.d）、联合组（西药RHZ0.325g/kg.d+月华胶囊中剂量1.4g/kg.d），正常组、模型组给予相应等容积的蒸馏水；②给药方法：灌胃给药，连续30d；③灌胃体积：体积为20mL/kg.d；④给药时间：造模后第1天开始，每天上午给相应药物1次，联合组先给月华胶囊中剂量，隔１h后再给西药。（4）病理形态观察：各组小鼠分别取肝脏，以10％甲醛溶液固定，脱水，浸腊包埋，5μm连续切片，HE染色，光镜下观察各组小鼠肝脏的病理形态学改变。 2 结果 光镜下观察肝脏：①正常