郁李花粉生活力及贮藏特性探究.docVIP

郁李花粉生活力及贮藏特性探究摘 要：以郁李花粉为试材，利用离体培养法、碘-碘化钾染色法、醋酸洋红染色法和TTC（氯化三苯基四氮唑）染色法对花粉生活力进行测定，并研究了不同贮藏条件对花粉萌发的影响。结果表明，培养基中添加不同浓度的蔗糖和硼酸对花粉的萌发有促进作用，郁李花粉萌发的最适培养基为：15%蔗糖+0.004%硼酸，萌发率达41.52%。花粉生活力随贮藏时间的延长而下降，不同的贮藏条件对其有显著的影响，适当的低温可有效延长花粉贮藏时间。其中-80 ℃萌发率最高，为最佳贮藏方法。 关键词：郁李；花粉；生活力；贮藏 中图分类号：S662.3 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.002 郁李（Prunus japonica Thunb）为蔷薇科梅属灌木，桃红色宝石般的花蕾，繁密如云的花朵，深红色的果实，美丽可爱，是园林中重要的观花、观果树种 [1]。 花粉在有性繁殖中传递着雄性亲本的遗传信息。在农业和林业的常规育种中，为了进行人工辅助授粉或杂交授粉，需要早期采集和贮存花粉。尤其是在杂交育种工作中，研究花粉的生活力和育性是必不可少的基础性工作[2]。保存花粉的活力是解决亲本花期不一致或远距离杂交的主要途径。花粉生活力的鉴定是采集和贮存花粉必须的检测内容。不同类群植物花粉在自然条件下的寿命、花粉的适宜贮存、营养条件以及花粉生活力的适宜测定方法均有所差异[2]。掌握适宜的培养、贮存方法及生活力检测的方法对于提高植物育种效率具有较高的实际应用价值。 国内外对郁李的研究主要集中在栽培[1]、园林应用[3]、病虫害防治[1]等方面，对郁李花粉生活力及其贮藏特性研究尚未见报道。为此，笔者通过用染色法、培养基萌发法对郁李花粉生活力进行了探讨，并研究了不同贮藏条件及时间对其花粉生活力的影响，以期为郁李的引种、育种提供依据。 1 材料和方法 1.1 材 料 郁李花粉采于河南科技学院院内。于晴天上午10：00采集，选取含苞待放的花朵，带回实验室后去除花瓣取花药于培养皿内，置于（25±1） ℃的培养箱散粉12 h后，收集花粉备用。 1.2 最佳培养基筛选 采用2因素（蔗糖、硼酸）完全随机试验，蔗糖为0，10%，15%，20%，25%；硼酸浓度为0，0.001%， 0.002%，0.003%，0.004%，0.005%。培养基均添加琼脂8 g·L-1，pH值调至5.8。 将培养基倒入凹玻片的凹处，与盖玻片表面平行，待冷却后，用头发丝蘸取花粉均匀散于培养基上，将凹玻片置于铺有两层湿滤纸的培养皿中，在（25±1） ℃的培养箱中培养2，4，8，16 h后，观察统计出萌发的花粉数和未萌发的花粉粒数。计算萌发率，每处理3次重复，每重复统计花粉数不少于100粒。 萌发率=萌发花粉粒数/总花粉粒数×100% 1.3 花粉染色法 1.3.1 I2-KI染色法 用头发丝蘸取花粉置于载玻片上，加一滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，静置3～4 min后置于显微镜下观察。染色后有生活力的花粉呈蓝色，无生活力的花粉无色。观察3张载玻片，每个载玻片取3个视野进行观察，计算有生活力的花粉所占百分率的平均值。 1.3.2 TTC（氯化三苯基四氮唑）染色法 用上述方法蘸取花粉置于载玻片上，加1滴0.5%TTC溶液，盖上盖玻片，置于30 ℃恒温箱中，10～15 min后镜检。凡被染红色的花粉活力强，淡红色次之，无色者为没有活力或不育花粉。观察3张载玻片，每张载玻片取3个视野进行观察，计算有生活力花粉所占百分率的平均值。 1.3.3 醋酸洋红染色法 蘸取花粉置于载玻片上，加一滴醋酸洋红溶液，盖上盖玻片，立刻置于显微镜下观察。凡被染成红色的均为有生活力的花粉。 1.4 贮藏方法 花粉采集阴干后，装入离心管放在以下4种环境条件下贮存：A.室温；B. 4 ℃；C. -20 ℃；D.-80 ℃。贮藏5，10，15，20，25 d后，取出花粉置于1.2所得最佳培养基培养，16 h后观察统计花粉萌发率。花粉耐贮藏力是以待测花粉活力保持时间即待测样活力降为零的时间长度来表示[4]。 2 结果与分析 2.1 离体培养法对郁李花粉萌发的影响 表1表明，花粉在单一蔗糖或硼酸的培养基上萌发率很低，其中20%蔗糖单独使用时最好，花粉的萌发率为21.17%，硼酸单独使用时以0.004%最好，萌发率为15.59%，但试验统计发现，20%蔗糖+0.004%硼酸培养基并不是花粉萌发的最适培养基。在完全随机试验中，蔗糖、硼酸、蔗糖×硼酸差异都极显著。表1表明，蔗糖和硼酸最佳的培养基为：15%蔗糖+0.004%硼酸，花粉萌发率最高，发芽率达41.