添加中药的灵芝发酵及其酪氨酸酶抑制活性的的分析研究.pdfVIP

摘要 摘要 酪氨酸酶(Ec1．14．18．1)是哺乳动物体内黑色素合成的关键酶。筛选天然来源的酪 氨酸酶抑制剂，为美白化妆品或以酪氨酸酶为作用靶点药物的开发提供依据。本研究从 27种中药中筛选出了适宜灵芝发酵的黄芩，优化了添加黄芩的灵芝培养条件，并初步研 究了灵芝发酵代谢产物的酪氨酸酶抑制活性。主要研究结果如下： 1．以儿茶酚为底物，420m下邻苯二醌的生成与反应时间成正比，建立了体外分 光光度法筛选酪氨酸酶抑制剂的测定体系，马铃薯酪氨酸酶的最适反应温度和最适反应 pH分别为30oc和6．5。依据建立的酪氨酸酶测定体系，研究了27味中药水提物、以 及27味中药经灵芝发酵后的酪氨酸酶抑制活性。6g／L的中药经灵芝发酵后，黄芩、杨 梅叶、绿茶、芦荟、桑叶和银杏叶较相同剂量的中药水提液的酪氨酸酶抑制率分别提高 中药的灵芝发酵液的酪氨酸酶抑制率为27．07％． 2．利用正交试验L16(45)和响应面法优化了灵芝深层发酵产生酪氨酸酶抑制剂的培 养基组成。确定的最佳培养基组成为：黄芩，6．3g，I，；麸皮，12．O班；蛋白胨，6．Og，【。； 玉米粉，15．6 g，L：葡萄糖，6．8g／L：豆饼粉，11．3g，L：磷酸二氢钾，1．5g，L。研究了 培养条件对灵芝发酵产生酪氨酸酶抑制剂的影响，确定的最佳培养条件为：培养温度， mL／500 30oC：装液量：150 mL三角瓶；摇床转速，125rpm．优化的培养条件下，发 酵液冻干粉浓度达到3．9m咖L时，最大酪氨酸酶抑制率为53．47％，与模型预测的酪氨 酸酶抑制率52．87％相符。25．0L反应器中的验证实验表明发酵时间120h，最大酪氨酸 酶抑制率为59．47％． 3．研究了优化培养条件下，黄芩对灵芝发酵过程的影响。添加黄芩时，灵芝发酵 过程的DH变化较未添加黄芩时缓和；灵芝发酵液的酪氨酸酶抑制活性显著提高。以芦 丁为底物对灵芝转化黄芩的机理进行了探讨，研究中发现灵芝中的B．糖苷酶可能对芦丁 转化为槲皮素．3．D-B—D一葡萄糖苷的过程起关键作用，由于糖基的去除，减少了黄酮与酪 氨酸酶作用的空间位阻，增加了转化产物的酪氨酸酶抑制活性。 4．对灵芝醇溶中性组分进行了Gc—Ms分析，检测到了匹配度为100％的灵芝甾醇， 质谱中的主要离子碎片与化合物结构非常吻合。灵芝醇溶中性组分对酪氨酸酶的半数抑 制浓度Ic50约为1．10mg，mLI 5．测定了灵芝酸的酪氨酸酶抑制活性，初步推断灵芝酸对酪氨酸酶的抑制为反竞 争性抑制。酶促反应动力学参数如下：酶促反应最大速度，％。x_0．4367IIlin一；米氏常 数，K庐6．765mm01／L；反竞争性抑制常数，Ki=9．036 铃薯酪氨酸酶的半数抑制浓度IC50为15．15 酸(Ic50为50岬ol／L)酪氨酸酶抑制活性的1．6倍。 关键词：灵芝，中药，黄芩，酪氨酸酶，灵芝甾醇，灵芝酸 Abmract AbstI翟ct the inmelallin of Tyrosinase(EC mammaliall． 1．14．18．1)iskeyeIlzyme bios”mesis This would ab硒ementfor也e of stIldy pmVide developing or whiteningagents mediciIle new inhibitorS．Fmm 够rosinase·ta唱etedbyscreeningnatumlly tyrosillase occIlrring