【2017年整理】谌巧玲毕业201506010zm.docx

分类号Q37学校代码10564UDC 学 号2012204001密 级硕 士 学 位 论 文水稻基因REL1调控叶形态分子机制的研究谌 巧 玲指导教师姓名张泽民 副研究员申请学位级别硕士专业名称植物遗传学论文提交日期2015年6月论文答辩日期2015年5月学院名称农学院学位授予日期2015年6月答辩委员会主席王少奎 教授学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名： 日期：导师签名： 日期：学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属华南农业大学。学校有权保存并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅（除在保密期内的保密论文外）；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用本授权书。□不保密。学位论文全文电子版提交后：□同意在校园网上发布，供校内师生和与学校有共享协议的单位浏览。(请在以上相应方框内打“√”)本人签名： 日期：导师签名： 日期：摘 要叶片的形态构成是水稻育种中最重要的农艺性状之一，因为适度的叶片卷曲和直立可以增加光合作用并减少蒸腾作用，进而增加水稻的生物量、增强对干旱等胁迫的耐性，最终实现水稻高产。但是，植物叶片的形态构成是一个极其复杂的生物过程，如何通过分子手段操作叶片的两极分化从而驱使叶片产生适度的卷曲和直立已成为水稻育种中很重要的一个研究课题。本实验室前期的研究筛选到了一个与叶形态相关的突变体，命名为rolled and erect leaf 1（rel1）。分子克隆证实rel1的突变表型是由于激活了一个仅存在于单子叶植物中的未知基因的表达所导致。此外，为了进一步了解REL1的生物学功能，以及其调控叶片形态的分子机制，利用酵母双杂交已筛选获得了7个与REL1互做的候选蛋白。本研究在以上的基础上进行开展，主要包括：1）表型鉴定和细胞生物学分析REL1过表达水稻；2）验证REL1和7个互作候选蛋白（REL1-interacting protein, RIPs）的结合；3）确定REL1蛋白的亚细胞定位；4）分析REL1基因和油菜素内酯途径（Brassinosteroids，BR）的相互关系。最后获得的主要结果如下：1、表型观察及细胞学结构分析表明REL1超表达转基因系OE-3和OE-6均重现突变体rel1的表型，表现出叶片卷曲、叶夹角增大、植株矮化以及泡状细胞数量增多和体积增大。该结果进一步说明，REL1正调控了泡状细胞的分裂和扩大。2、利用酵母双杂交和BiFc（Bimolecular fluorescence complementation）技术，以RIP3和RIP4为代表，验证了RIPs与REL1的体内互作。3、构建了35S:REL1-GFP转化载体，在水稻原生质体中瞬时表达的结果证实 REL1-GFP蛋白定位于质体。4、对野生型、突变体rel1及REL1超表达转基因系OE材料叶夹角外源施加24epi-BL，发现突变体rel1和REL1超表达转基因材料OE的叶夹角对BR不敏感。此外，对上述材料进行qRT-PCR的分析表明BR合成相关基因的表达并未出现显著变化，然而信号途径相关基因的表达均有不同程度的变化，说明REL1极有可能协同BR信号转导调控了叶片形态的构成。总之，本研究为揭示和解析水稻基因REL1在叶形态调控中的作用机制提供了实验证据和理论依据，为将来的水稻理想株型新品种的培育提供了一个新靶标。关键词：水稻；基因REL1；油菜素内酯；亚细胞定位；酵母双杂交；BiFc Functional Analysis of Rolled and Erect Leaf 1 in Regulating Leaf Morphology in Rice (Oryza sativa L.)Chen Qiaoling (College of Agriculture, South China Agricultyral University, Guangzhou 510642, China)Abstract: Leaf morphology is one of the most important agronomic traits in rice breeding, becaus