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前言
弱，结果导致胞浆内钙超载。钙通道阻滞剂可通过阻止细胞钙离子内流成为抑
制凋亡的一种手段。目前已有研究发现钙通道阻滞剂对缺血再灌注、阻塞性黄
疸、肝毒性药物等多种因素引起的肝细胞损伤具有保护作用，但参与其中的分
子网络机制尚未阐明。
目前发现比较重要的凋亡调控基因bcl-2家族、p53、AKT等，Bcl．2家族是
transition，PT)通道的稳
一组通过影响线粒体外膜上通透性转换(permeability
定性来调控细胞凋亡的蛋白质。Bcl．2家族大致可以分为两类：Bcl-2、Bcl—xL等
放来促进细胞凋亡。Bax对细胞凋亡的调节作用～直受到人们的关注。Bax基因
与Bcl．2基因同源，二者可形成异二聚体或Bax与自身形成二聚体，Bax基因过
度表达时，细胞凋亡增多，而Bcl．2表达增高时，它与Bax结合，凋亡被抑制，
因此Bcl．2与Bax的比例决定着细胞受凋亡因素刺激后的生存与凋亡。
本课题采用苯烷胺类钙通道阻滞剂维拉帕米处理阻塞性黄疸大鼠模型，检
测维拉帕米对阻塞性黄疸肝细胞凋亡及凋亡相关基因bax和bcl-2表达的影响，
探讨维拉帕米影响肝细胞的凋亡的作用途径。
2
材料与方法
第二章材料与方法
2．1 主要仪器试剂和设备
2．1．1主要试剂
苏木素 上海化学试剂公司
伊红 上海化学试剂公司
EDTA 上海五联化工厂
多聚甲醛 上海溶剂厂
3％过氧化氢 上海金鹿化工厂有限公司
无水乙醇 上海振华化工厂
戊巴比妥钠粉剂 南昌东湖强生公司
盐酸维拉帕米注射液 上海丰和制药公司
Bax免疫组化试剂盒 北京中杉金桥生物技术公司
Bcl．2免疫组化试剂盒 北京中杉金桥生物技术公司
TUNEL原位细胞凋亡试剂盒 美国promega公司
PBS缓冲液 自配
2．1．2主要仪器设备
RM2135石蜡切片机 德国Leize公司
DNP．9162恒温培养箱 上海精宏实验设备有限公司
双目Olympus光学显微镜 日本Olympus公司
80．2离心机 ．金坛市恒丰仪器厂
微波炉 格兰仕公司
日立7150型全自动生化分析仪 日本日立公司
普通冰箱 海尔冰箱厂
Eppendorf加样器
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