针刺四肢部不同腧穴对失眠模型大鼠脑干内5-HT、5-HIAA和NE影响实验地.pdfVIP

材科和方法 材料和方法 1实验材料 1．1实验动物 实验中心提供。 1．2主要药品与试剂 5一羟色胺标准品、5一羟吲哚乙酸标准品、去甲肾上腺素标准品、邻苯二甲 配成混悬液，备用。(以上实验用药均为美国Sigma公司产品，购于郑州市金水 区康桥实验产品经营部)。 1．3实验仪器 CR21型高速冷冻离心机 HITAHI生产 AB204一N电子天平 意大利生产 MTF一4型荧光分光光度计 日本岛津生产 DK一8A水浴箱 上海医用恒温设备厂生产 34号针灸针 苏州医疗用品有限公司 止血钳、组织剪、镊子、净化台、细棒、清洁玻棒等(由中药学院药理实验 室提供1鼠板，鼠夹，鼠盒，鼠笼等(由河南中医学院动物实验中心提供)。 2实验方法 2．1实验分组 wistar大鼠60只，自由饮食摄水，自然光照，适应环境1周，称重后随机 分为以下6组，每组10只。 空白对照组 只抓取不治疗 模型对照组 只造模不治疗 针刺“内关”组 造模成功后，每天针刺一次，连续7天 针刺“三阴交”组 造模成功后，每天针刺一次，连续7天 针刺“神门”组 造模成功后，每天针刺一次，连续7天 针刺“足三里”组 造模成功后，每天针刺一次，连续7天 2．2造模方法 临用前按大鼠450mg／kg用量，将PCPA用生理盐水配置成混悬液备用。腹 30h后，大鼠出现昼夜节律消失，白天也活动不停，整体观察与空白对照组有明 针剌四肢部不同腧穴对失眠模型大鼠脑干内5．HT、5．HIAA和NE影响的实验研究 显不同，表明模型复制成功。 2．3治疗方法 2．3．1取穴与针具 根据李忠仁主编的《实验针灸学》16】。 “内关”：前肢内侧，离腕关节约3mm左右的尺桡骨缝间，直刺1mm； “三阴交”；后肢内踝尖直上10咖，直刺3mm； “神门”：前肢内侧腕部横纹头小指侧，直刺1咖； “足三里”(后三里)：膝关节后外侧，在腓骨小头下约5mm处，直刺3吣。 针具：针身直径O．23彻。长15岫。 2．3．2针刺操作 造模后第3日清晨7时30分对治疗组予以针刺治疗，大鼠常规消毒后，“神 门”、“内关”直刺约1岫，“三阴交”、“足三里”直刺约3啪，．进针后平补平泻 手法捻转行针2min，不留针；模型组和空白对照组按程序只抓取不治疗；1次 ／d，连续7d。 2．4观察指标及方法 2．4．1实验动物体重增长情况的观察 治疗开始和实验结束时分别称量动物体重，计算体重增加量。． 2．4．2抗疲劳试验 采用爬竿法【71。取直径约为O．6cm，长约为100cm的细棒，垂直固定，置于 一个注有水的圆盆中央，将大鼠放于距棒顶端约30cm的地方，使其头朝上抓住 细棒，用秒表记录其由于疲劳而滑下之前在棒上的持续时间。每只大鼠试验3 次，以3次平均值为准，观察大鼠对疲劳的耐受能力。于治疗结束当天19时30 分开始进行。 2．4．3脾脏指数测定和胸腺指数测定【8l 治疗结束后第二天清晨7时30分，称重，脱颈椎处死大鼠，立即取出脾脏 和胸腺称重，计算脾脏指数和胸腺指数。 计算公式：脾脏指数=脾脏质量(mg)／体重质量(g) 胸腺指数=胸腺质量(mg)／体重质量(g) 2．4．4大鼠脑干内5一HT、5一HI从和NE含量的测定【9l 治疗结束后第二天清晨7时30分，将大鼠断头处死，取脑，放在预先冰冷 的生理盐水中，去除脑膜血管，在冰上分出脑干，组织称重后立即置于含有冰 冷酸性正丁醇(100mg组织／3ml正丁醇1的匀浆器中，在冰浴条件下充分匀浆后， 离心。 1)取正丁醇上清液两份，分别加正