大蒜素抗鸽毛滴虫效果的研究.doc

大蒜素、茜草素抗鸽毛滴虫效果的研究 摘要目的：探究大蒜素、茜草素体外抗鸽毛滴虫的有效浓度。 方案：用肝浸汤将大蒜素溶液、茜草素溶液倍比稀释得不同浓度含药培养基，对鸽毛滴虫进行体外培养，分别在2h，4h，8h，12h，24h观察虫体状况，计算不同浓度下的死亡率，得到有效浓度。 结果：大蒜素在体外对鸽毛滴虫有抑制效果，100%杀虫率最低浓度是1mg/ml，高于此浓度时，随着药物浓度的增加100%杀虫率时间会缩短。 茜草素在体外对鸽毛滴虫有抑制效果，100%杀虫率最低浓度是0.75mg/ml，高于此浓度时，随着药物浓度的增加100%杀虫率时间会缩短。结论：大蒜素、茜草素对鸽毛滴虫有较强的抑制效果。 关键词大蒜素，茜草素，鸽毛滴虫，抑制效果 鸽毛滴虫（Pigeon trichomonas）病的病原属鞭毛亚门，动鞭毛纲，多鞭毛目，毛滴虫科毛滴虫属的禽毛滴虫[ 1]。鸽毛滴虫病是一种侵害消化道上段的原虫病，其主要特征是在咽喉部粘膜处呈现明显的钮扣状黄色沉着物或溃疡面，常常造成上消化道和呼吸道阻塞，妨碍进食及正常呼吸，引起食欲差，精神不振，消瘦，生长发育缓慢，并伴有腹泻, 严重的可导致死亡[2]。鸽毛滴虫潜伏期一般为4-14天，常感染1-5周龄的幼鸽，病程一般3-20d不等。鸽毛滴虫病在鸽群中普遍存在，极易传播，如幼鸽能从父母鸽直接通过喂食受到感染，或接触到有病虫的鸽子分泌物感染等。目前最广泛的治疗药物是甲硝唑，效果虽好但此药物却有致癌、突变等副作用，且在近年生产中出现明显的耐药性[3]，在2002的农业部文件中甲硝唑被禁止用于所有动物源食品生产，所以寻求替代甲硝唑用于防治鸽毛滴虫病就显得尤为重要。采用中草药抑制鸽毛滴虫的研究较少，所以本实验用大蒜素、茜草素来杀灭鸽毛滴虫，并探究出大蒜素、茜草素溶液的有效浓度。 材料与方法 1.1药物制备 大蒜素颗粒（纯度25%,山东聚德药业有限公司），取40mg大蒜素溶于5ml蒸馏水，配成8mg/ml大蒜素溶液。茜草素（南京泽朗医药公司），呈凝胶状，取60mg茜草素溶于5ml蒸馏水，用蒸馏水配成12mg/ml，4℃冰箱保存。用超声波清洗仪震荡，保证完全溶解，4℃冰箱保存。 1.2培养基 选用鸽肝浸汤培养基。鸽肝脏15g，切碎呈小米粒大小，浸泡入100ml蒸馏水中，置4℃冰箱中过夜，隔天取出后，加热煮沸30min，经纱布过滤，补充蒸馏水至100ml。将蛋白胨2g，麦芽糖1g，氯化钠0.5g，L－半胱氨酸盐酸盐0.2g与其混合，加热促溶，经细滤纸过滤，调节pH至5.6～5.8，分装入试管，每管3.5ml，121℃高压灭菌30min，冷却后置37℃恒温箱中24h，证明无菌后－4℃保存备用。用一次性针管对白羽王鸽（鸽子取自南京市六合区东沟镇养鸽场）进行翅静脉采血，将采得的鸽血置于37℃恒温箱中，放置2～3h后取出，用吸管吸取上层血清。将鸽血清置于55～56℃水浴中加热30min灭活补体，分装后，冷冻保存备用。 1.3实验虫株 取自南京市六合区东沟镇养鸽场的感染鸽毛滴虫的病鸽。用消毒棉签在患鸽口腔咽喉部取黏液或黄色干酪样物质分泌物，接种于培养基中，置于37℃恒温箱中培养，每3d传代一次，经过体外连续培养3～4代以后，然后从中取样转接于另外一瓶20ml的培养液中，待其大量繁殖之后，用于本实验[4] 。 1.4实验器材 XA-1高速组织捣速机，电磁炉，烧杯，玻璃棒，纱布，试管，一次性注射器，一次性吸管，KQ-800KDV型 高功率数控超声波清洗器，纯水机，电热恒温培养箱，显微镜，数显恒温水浴锅，FA1204B电子天平，一次性丁腈手套，超低温保存箱，冷冻离心机，立式压力蒸汽灭菌器，移液枪，生物洁净安全柜，EP管，血球计数板 1.5实验方案 将已配置好的8mg/ml的大蒜素溶液，用肝浸汤按1:1,1:2,1:4,1:8倍比稀释，最终浓度配成4mg/ml，2mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml的含药培养基，每管总量1ml，设空白对照组。取培养24h滴虫，2000r/min，10min，弃上层清液留沉淀加1ml新鲜保温的培养液充分摇匀。用培养液调整滴虫数1×105个/ml，上述各实验管和对照管分别加入0.2ml该含虫液，37℃恒温培养。分别培养2h，4h，8h,12h,24h在显微镜下观察鸽毛滴虫存活情况。死虫判断：虫体变圆，边缘不整，轮廓不清，鞭毛和波动膜不运动，内含大量颗粒[5] 。死亡率=死虫数/观察总虫数 ×100% 2.结果 2.1大蒜素抗鸽毛滴虫效果 大蒜素体外抗鸽毛滴虫效果（见表1）大蒜素体外对鸽毛滴虫有抑制作用，药物浓度在0.5mg/ml—4mg/ml时，对鸽毛滴虫有抑制作用。大蒜素100%杀虫率最低浓度为1mg/ml，药物作用时间需要24h，随着药物浓度的增加，各实验组死亡率增高，各组100%死亡率时间