第15章 蛋白质的合的成.doc

第15章 蛋白质的合成 一、 教学大纲基本要求 蛋白质合成的一般过程以及参与蛋白质合成的各种大分子（包括翻译因子）的结构与功能，蛋白质合成后的加工形式与转运机制，主要内容包括，1.遗传密码，遗传密码的破译策略，遗传密码的特点，2.蛋白质生物合成中的生物大分子结构及其作用，mRNA，rRNA，核糖体，辅助因子。3.蛋白质生物合成的一般过程，原核生物与真核生物蛋白质合成的异同，常用的原核型与真核型蛋白质合成抑制剂，4.多肽合成后的定向输送与加工，信号肽及信号肽的识别，内质网上多肽的糖基化修饰，高尔基体中多肽的糖基化修饰及多肽的分捡（sorting），线粒体、叶绿体蛋白质的来源。 二、 本章知识要点 （一）遗传密码 1、遗传密码的破译 主要利用无细胞体外翻译体系，在外加不同的RNA模板、20种标记的氨基酸后，分析多肽产物的氨基酸序列。美国科学家M.W.Nirenberg等由于在该领域的开创性工作于1968年获诺贝尔生理医学奖。 2、遗传密码的特点 在64个密码子中有61个编码氨基酸，3个不编码任何氨基酸而起肽链合成的终止作用，称为终止密码子，它们是UAG、UAA、UGA，密码子AUG（编码Met）又称起始密码子。 （1）方向性：由mRNA的5’向到3’编码 （2）连读性：编码一个肽链的所有密码子是一个接着一个地线形排列，密码子之间既不重叠也不间隔，从起始密码子到终止密码子（包括终止子）构成一个完整的读码框架，又称开放阅读框架（ORF）。如果在阅读框中插入或删除一个碱基就会使其后的读码发生移位性错误（称为移码）。两个基因之间或两个ORF之间可能会互相部分重叠（共用部分碱基序列）。 （3）简并性：几种密码子编码一种氨基酸的现象称为密码子的简并性。如GGN（GGA、GGU、GGG、GGC）都编码Gly，那么这4种密码子就称为Gly的简并密码。只有Met和Trp没有简并密码。一般情况下密码子的简并性只涉及第三位碱基。 （4）变偶性：密码子中第三位碱基与反密码子第一位碱基的配对有时不一定完全遵循A-U、G-C的原则，Crick把这种情况称为摇摆性（变偶性），也称摆动配对或不稳定配对。密码子的第三位和反密码子的第一位是摇摆位点。 (5)通用性与变异性：密码子在不同物种间几乎是完全通用的，但线粒体和叶绿体内有列外情况，不同生物往往偏爱某一种密码子。 （二）蛋白质合成的分子基础 1、mRNA，不仅是蛋白质合成的模板，而且参与核糖体的组装与翻译起始 （1）原核生物mRNA的结构 ①5’端SD序列：在起始密码子AUG上游9-13个核苷酸处，有一段可与核糖体16S rRNA配对结合的、富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为AGGA，此序列称SD序列。它与核糖体小亚基内16S rRNA的3’端一段富含嘧啶的序列 GAUCACCUCCUUA-OH互补，使得结合于30S亚基上的起始tRNA能正确地定位于mRNA的起始密码子AUG上。② 许多原核mRNA是多顺反子。转译时，各个基因都有自己的SD序列、起始密码子、终止密码子，分别控制其合成的起始与终止，也就是说，每个基因的翻译都是相对独立的。 （2）真核生物mRNA的结构 ①真核mRNA5’端具有m7GpppN帽子结构，无SD序列。帽子结构具有参与翻译起始、增强翻译效率的作用。若起始AUG与帽子结构间的距离太近（小于12个核苷酸），就不能有效利用这个AUG，会从下游适当的AUG起始翻译。当距离在17-80个核苷酸之间时，离体翻译效率与距离成正比。②真核生物mRNA的Poly（A）尾巴与mRNA的稳定性有关 2、tRNA转运活化的氨基酸至mRNA模板上 可以说tRNA是一个万能接头： （1）氨酰- tRNA合成酶的识别位点（结合氨酰tRNA合成酶） （2）3端-CCA上的氨基酸运载位点（结合氨基酸）， （3）核糖体的识别位点（将氨基酸运送到目的地）， （4）反密码子位点（配对mRNA，卸载氨基酸） 3、核糖体是蛋白质合成的工厂 标记各种a.a，注入大鼠体内，在不同时间取出肝脏，匀浆，离心分离各种亚细胞器，分析放射性蛋白的分布，发现蛋白质的合成是在核糖体上进行的。游离核糖体主要合成细胞质蛋白，内质网核糖体主要合成分泌蛋白和细胞器蛋白。不论原核细胞还是真核细胞，一条mRNA可以被同时几个核糖体阅读，把同时结合并翻译同一条mRNA的多个核糖体称为多核糖体。 （三）蛋白质合成的一般过程 1、氨基酸的活化和氨酰tRNA的合成 活化和连接都发生在氨基酸的羧基上，其羧基与tRNA 3端的自由-OH形成氨酰酯键，从而形成氨酰tRNA，这是一个高能化合物，其能量足以形成肽键。 2、专门的起始tRNAi启动蛋白质的合成 原核生物的起始氨酰-tRNA的合成机制： 延伸氨酰-tRNA的合成机制： 真核生物的起始氨酰-tRNA的合成机