细胞工程第五章生物制品生产-改.pptVIP

第一节 细胞大规模培养 大规模培养技术是建立在实验室培养方法（贴壁培养法和悬浮培养法）的基础上，再利用固定化细胞、人工灌注、生物反应器技术等技术发展起来的。 一、细胞培养的操作方式 二、大规模细胞培养系统 一、细胞培养的操作方式 培养方式分为： 分批式 流加式培养 半连续式 连续灌注式 1、分批式培养 指先将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，产物不断形成，经一段时间后，终止培养。 分批式培养特点 ①系统密闭，只允许气体和挥发性代谢物质与外界交换。 ②培养基体积固定，当主要营养物质耗尽时，细胞即停止生长，又称为分批培养或间歇培养，多在3-5d/批。 ③细胞数目、总重量、DNA含量呈“S”形(五个时期)变化。 ④为保证细胞不断增殖，须在达到最大重量时取出1/5～1/3的培养液，转移继代培养。 ⑤是传统的、常用的方法，可直接放大。其工业反应器规模可达 12000L。 2、半连续式（流加式）培养 指在分批式培养的基础上，将分批培养的培养液部分取出，并补充加入等量的新鲜培养基，使反应器内培养液的总体积保持不变。 3、流加式培养 在分批式操作的基础上，在培养过程中根据细胞对营养物质的不断消耗和需求，流加浓缩的营养物或培养基，从而使细胞持续生长至较高的密度，目标产品达到较高的水平。 由于流加式培养能控制更多的环境参数，使得细胞生长和产物生成容易维持在优化状态，是当前动物细胞培养工艺中占有主流优势的培养工艺。 4、连续灌注式培养 是把细胞接种后进行培养，新鲜的培养液不断从反应器一头加入，从另一头不断取出等量的培养液，细胞仍留在反应器内，使细胞处于一种营养不断供应状态。使反应条件处于一种恒定状态。 连续灌注式培养特点 1）不断加入新培养基，保证了营养物质的充分供应。 2）培养期细胞增殖速度快，细胞生长速率长久地保持在对数生长期，形成一个稳定的培养状态。 3）适用于细胞大规模工业化培养。 4） 由于连续培养需要的设备比较复杂，投入较大，且要维持细胞无菌状态，技术条件要求苛刻，因此未得到广泛应用。 开放式连续培养----细胞随排出培养液一起流出且速度恒定。在稳定状态下流出细胞的速率等于培养系统中新细胞的增长速率。 封闭式连续培养----新鲜培养液和老培养液以等量方式进出，而收集的细胞重新放入原培养系统中继续培养，故培养系统中细胞数量是在不断增加的。 二、大规模细胞培养方法 按供养方式分为三种： 搅拌式、气升式、旋转式 按细胞固定分为四种： 悬浮培养、 微载体培养、 微囊化培养、 微导管培养（中空纤维培养）。 机械搅拌式(Spinner) 机械搅拌式主要是通过不锈钢搅拌系统使培养物的混匀。在罐体顶端有一些传感器，监测培养物的温度、pH值、溶氧度(DO)、葡萄糖消耗、NH3、NH4+等参数。这种反应器培养规模可达2 000 L。 该系统优点： （1）设计简单，操作方便，易于放大生产； （2）细胞密度高，达到107/mL以上； （3）便于无菌操作，不易污染； （4）氧的转换率高，能满足细胞在生长时所需的要求。 缺点： 对细胞损伤较大，产物含量不高。 气升搅拌式 气体从罐底的喷射管进入反应器的导流管。湍流温和而均匀，循环量大，细胞与培养液混合均匀。剪切力小，细胞的伤害小。喷射供氧，氧传递速率高，供氧良好。适用于悬浮细胞分批培养、微载体和连续培养。 通气搅拌式细胞培养反应器 旋转式细胞培养系统 20世纪90年代中期，美国宇航局开发一系列旋转式细胞培养系统(The rotary cell culture system, RCCS)，又叫回转式生物反应器(Rotatingwall vessel biore-actor, RWVB)。 RCCS是绕水平轴旋转、无气泡、膜扩散式气体交换的培养系统。 该反应器是将细胞种植到微载体后，将其移入RCCS圆柱状的培养容器内，加满培养液。整个容器由电机驱动沿水平轴旋转，细胞微载体颗粒在水平轴内建立均质的液体悬浮轨道，并随容器一起旋转且不与容器壁和其它物体相撞。细胞通过膜式气体交换器来吸氧和排出CO2。 由于系统无推进器、气泡或搅拌器,使破坏性应力减到最小。因此，细胞可以在相对温和的环境中进行三维生长，得到类似人体内的培养产物. 近年来已经广泛应用于微载体系统，至今已有近百种组织细胞均在该系统内成功进行了大规模扩增。 悬浮培养 与微生物的肉汤培养基本相同。 悬浮培养细胞增殖快、产量高，没有接触抑制特性，是动物大规模培养的理想方法。 但只有极少数动物细胞适宜进行悬浮培养，适用于确立细胞株（系）、杂交瘤细胞、肿瘤细胞、血液和淋巴细胞培养。 微载体培养 微载体为三维培养系统，细胞贴附于