EGFR表达相关因素分析.docVIP

EGFR表达相关因素分析 　【关键词】 EGFR表达；基因扩增；CA-SSR1多态性 　　表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是由1186个氨基酸组成的相对分子质量为170×103的膜蛋白，其结构可分为：（1）可与特异性配体结合的细胞外部分；（2） 穿过细胞膜的部分；（3）具有酪氨酸激酶活性的细胞质部分。EGFR与相应的配体结合后，EGFR发生二聚化，引起质膜或胞内酪氨酸残基特异蛋白激酶从无活性转变为有活性形式，从而对作用底物的某些酪氨酸残基进行特异磷酸化。正常表达的表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)信号系统控制着细胞的增殖、生长、分裂、分化；EGF信号系统中任一环节受到干扰或破坏都会使细胞的增殖、生长、分裂、分化从有控制状态转变为失控状态。EGFR在多种恶性肿瘤中呈高表达状态，如：非小细胞肺癌、头颈癌、胃癌、食道癌、结直癌、乳腺癌、膀胱癌等。EGFR的过度表达使肿瘤病人的生存期缩短、对化疗不敏感、乳腺癌病人内分泌治疗失败；随着对EGFR相关信号途径的认识促进了EGFR靶向治疗的发展。因此正确认识EGFR的表达对于制定个体化的治疗方案及估计病人预后有非常重要的作用。 　　1 EGFR的基因结构 　　EGFR基因位于染色体7p12。在EGFR基因的5端调节序列中有一富含CG碱基的启动子，但没有任何保守序列，如TATA或CAAT盒，因此在启动子区域有多个起始位点可以进行转录。EGFR基因有三个增强子:增强子1位于靠近启动子的位置；下游增强子（增强子2）位于内含子1（＋1，788 ～ ＋2，318）中，紧邻CA双核苷酸简单重复序列（CA simple sequence repeat，CA-SSR1）；增强子3位于启动子上游（－1，439 ～ －1，109）。其中增强子2必须依靠增强子3才能发挥调节EGFR基因转录活性的作用。 　　2 EGFR基因扩增与EGFR表达 　　基因扩增是指某一些特定亚染色体区段拷贝数的增加，而不包括整个基因组、染色体、臂或大片段染色体区域的扩增。基因扩增通常意味着这些基因的过度表达。尽管EGFR基因扩增的机制还不是很清楚，但近年来关于EGFR基因扩增的资料却在不断的增加。正常或重组的EGFR基因扩增见于约50％的脑胶质细胞瘤及某些鳞癌。 　　Ekstrand，A.J.等［1］报道在36例Ⅳ级脑胶质细胞瘤（34例原发，2例复发）病人中，发现50％的病人EGFR基因扩增（与2倍体相比）10-110倍，在16例基因扩增的病人中有13例mRNA表达增加（ ≥＋＋，“＋＋＋”表示mRNA表达与“A431”细胞珠相等），免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）结果分析显示EGFR蛋白表达与转录水平有很好的相关性。而Christine H等［2］用DNA微阵列技术研究了33例头颈部鳞癌标本，实验结果统计分析显示mRNA表达与基因复制无关（P=0.37 Students test）；为了进一步证实此结果Christine H等用敏感性高的RT-PCR来分析具有代表型性的13例头颈部鳞癌标本（4例基因扩增，3例高异倍体，3例低异倍体，2例3倍体；1例正常即2倍体）。结果显示在荧光原位杂交（Fluorescene in situ hybridization，FISH）实验中，结果阳性与阴性的标本，总RNA的表达无差别（P=0.72 Students test）；同样，50例头颈部鳞癌IHC实验结果显示EGFR蛋白表达水平与FISH实验结果无关（P=0.72 Fishers exact test）。Christine H等分析以上实验结果可能的原因如下：1.表型遗传机制，比如启动子甲基化导致绝大多数EGFR基因复制无转录活性。在这种情况下，因为遗传压力基因复制增多，但在肿瘤形成阶段却无转录活性；2.基因复制可能被转录，但转录后的RNA异常剪接；异常剪接的RNA不能与cDNA探针结合，导致DNA微阵列及RT-PCR实验结果呈阴性；3.IHC技术在量化评价EGFR蛋白上的局限性。 Hirsch FR等［3］报道了69例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer ，NSCLC)病人：EGFR蛋白表达阴性或低的病例中，有35例（51％）为二倍体，33例（48％）为三倍体，1例为多倍体；相反，46例蛋白表达中等的病例中，有8例（17％）为多倍体或基因扩增；68例蛋白呈高表达的病例中，30例（44％）为多倍体或基因扩增。统计分析显示，蛋白表达与基因复制密切相关（Plt; 0.001）。IHC结果评分如下：2倍体：206分；3倍体：213分；多倍体：355分；基因扩增：36