HPLC法测定双花滴耳液中绿原酸含量.docVIP

HPLC法测定双花滴耳液中绿原酸含量 　【摘要】 ：目的 建立双花滴耳液中绿原酸含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,Kromasil C18柱(5 μm,4.6 mm×250 mm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(15∶85),检测波长为328 nm,流速：1.0 mL/min,柱温：室温。结果 平均回收率为99.8%,相对标准偏差为1.51%(n＝5)。结论 本试验所建立的高效液相色谱法绿原酸在0.102 4～0.614 4 μg线性关系良好。 【关键词】 双花滴耳液　绿原酸　高效液相色谱法 　 Abstract：Objective To establish the method of content determination of chlorogenic acid in Shuanghua eardrop. Methods High performance liquid chromatography (HPLC) was adopted with Kromasil C18 column (5 μm, 4.6 mm×250 mm) and acetonitrile-0.4% phosph acid solution (10∶85) as the mobile phase. The detective wavelength was 328 nm, the flow rate was 1.0 mL/min, column temperature was room temperature. Results Average recovery was 99.8%, relative standard error was 1.51% (n＝5). Conclusion The linearity relationship of chlorogenic acid was good at the range of 0.102 4～0.061 44 μg. 　　Key words：Shuanghua eardrop；chlorogenic acid；HPLC 　 双花滴耳液是甘肃省中医医院研制的中药复方制剂,由金银花、连翘等4味中药组成,具有消肿止痛、解毒排脓、敛湿祛腐、生肌之功效,临床上用于化脓性中耳炎的治疗。该处方成分复杂,为了控制药品质量,我们采用高效液相色谱(HPLC)法对其中绿原酸的含量进行测定[1],结果满意,可作为该制剂定量控制指标之一。 　　1 仪器与试药 　 LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津)；UV-250PC(日本岛津)；超声波振荡器(上海超声波仪器厂)；METTLER AE240电子天平。对照品绿原酸(中国药品生物制品检定所提供,供含量测定,批号110753-200413)；双花滴耳液(甘肃省中医医院制剂室自制)。试剂除乙腈为色谱纯外,其它均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　　2.1 色谱条件 　 色谱柱：Kromasil C18柱(5 μm,4.6 mm×250 mm)；检测波长为328 nm；流动相：乙腈-0.4%磷酸水溶液(15∶85)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：10 μL。色谱图见图1。 　　2.2 对照品溶液的制备 　 精密称取60 ℃真空干燥至恒重的绿原酸对照品6.4 mg,用甲醇溶解并定容至50 mL,准确吸取4 mL,以乙醇定容至10 mL,制成浓度为0.051 2 mg/mL的对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　 精密量取本品10 mL,置50 mL量瓶中,加无水乙醇30 mL,超声处理30 min,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,以0.45 μm滤膜滤过,即得。 　　　2.4 阴性对照液的制备 　 按处方比例及制备工艺,配制不含金银花的阴性对照品,并照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。 　　2.5 线性关系考察 　 精密吸取绿原酸对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL分别进样,按上述色谱条件进行测定,并以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标进行线性回归,得回归方程为：Y＝78 348.12X＋314.58,相关系数r＝0.999 8。结果表明,绿原酸在0.102 4～0.614 4 μg范围与其峰面积积分值呈良好的线性关系。 　　2.6 精密度试验 　 精密吸取上述对照品溶液10 μL,按上述色谱条件进行测定,连续重复进样5次,绿原酸峰面积RSD＝0.92%,结果表明,该法的精密度良好。 　　2.7 稳定性试验 　　取上述对照品溶液及供试品溶液,按上述色谱条件,分别在0、2、4、6、8、10 h测定,结果对照品溶