HPLC法测定大黄微波提取物中大黄酸及番泻苷A含量.docVIP

HPLC法测定大黄微波提取物中大黄酸及番泻苷A含量 　【摘要】 目的 建立大黄微波提取物中大黄酸、番泻苷A两种泻下成分的含量测定方法。方法 采用HPLC法，色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相：甲醇0.1%磷酸（体积比80∶20），流速：1.0 mL/min，检测波长：254 nm，柱温：25 ℃。结果 测定3批提取物，大黄酸和番泻苷A平均质量分数分别为7.24 mg/g和10.28 mg/g。结论 本法简单快捷，结果可靠，可作为大黄提取物中大黄酸和番泻苷A的含量测定方法。 【关键词】 HPLC法；大黄提取物；大黄酸；番泻苷A 　　Abstract:Objective To determine the contents of rhein and sennoside A in extracts of rhubarb prepared with microwave extraction ． Methods Samples were analyzed on a Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm，5 μm) column using methyl alcohol0.1%H3PO4 (80∶20) as mobile phase．The flow rate was 1.0 mL/min and UV detection wavelength was 254 nm．The column temperature was 25 ℃．Results Contents of rhein and sennoside A in the extracts of rhubarb were 7.24 mg/g and 10.28 mg/g, repectively．Conclusion The method is simple and reproducible，which could be used for the analysis of rhein and sennoside A in rhubarb extracts． 　　Key words:HPLC；rhubarb extracts；rhein；sennoside A 　　大黄的泻下成分为蒽醌类，以番泻苷A（sennoside A）的泻下作用最强，大黄酸（rhein）亦有一定泻下作用。本文在参照文献［1-3］的基础上，建立了测定大黄微波提取物中的大黄酸和番泻苷A这两种泻下成分含量的HPLC法，为研究大黄不同提取工艺提取物、不同大黄品种、大黄不同部位泻下作用大小奠定了成分分析方面的基础。 　　1 仪器与试药 　　 　　岛津LC10A泵、SPD10A检测器、KQ250型超声波清洗器（250 W，40 kHz，昆山市超声仪器有限公司）、电热套（山东鄄城光明仪器有限公司）。 　　 　　大黄酸（批号：110757200206）购自中国药品生物制品检定所；番泻苷A(批号：1126070购自SIGMA公司；大黄药材购自陕西省宝鸡市药材公司，经本院药用植物与中药鉴定学教研室严寒静副教授鉴定为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L．)；大黄提取物（自制）。 　　 　　甲醇为色谱纯（Merk公司），超纯水为自制，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：甲醇0.1%磷酸（体积比80∶20），流速：1.0 mL/min，检测波长：254 nm，柱温：25 ℃，进样量：20 μL。理论塔板数以番泻苷A计算应不低于11 000。 　　2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄酸对照品1.0 mg、番泻苷A对照品10 mg，分别置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别得到大黄酸对照品贮备液和番泻苷A对照品贮备液。进样前用0.45 μm微孔滤膜滤过。精密吸取两种对照品贮备液各3 mL，置同一个10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀,按“ 　　2.1”项下色谱条件进样，得对照品溶液色谱图，见图1。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　HPLC法测定大黄微波提取物中大黄酸和番泻苷A的含量精密称取大黄微波提取物适量(约含生药0.5 g)，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，超声提取30 min，滤过。滤渣重新置具塞锥形瓶中，加入三氯甲烷20 mL，超声再提取30 min，滤过。滤渣加2.5 mol／L H2SO4 15 mL，电热套加热1 h，冷却至室温，加入三氯甲烷15 mL回流30 min，冷却后置分液漏斗中，分出三氯甲烷液，重复萃取3次，合并三氯甲