HPLC法测定注射用甲硫氨酸维B1中甲硫氨酸及维生素B1含量.docVIP

HPLC法测定注射用甲硫氨酸维B1中甲硫氨酸及维生素B1含量 　【摘要】; 目的 建立测定注射用甲硫氨酸维B1中甲硫氨酸和维生素B1的含量的方法。方法 釆用高效液相色谱法，色谱柱：ODSC18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：缓冲液［取庚烷磺酸钠0.25 g，用磷酸钠溶液（取磷酸钠38 g,加水至1 000 mL使溶解，用磷酸调pH值至2.1）溶解并稀释成1 000 mL］乙腈（体积比94∶6），流速1.0 mL/min，检测波长为21 0nm。结果 甲硫氨酸在0.60～1.40 mg/mL浓度范围内线性关系良好( r=0.999 6)，维生素B1在0.06~0.14 mg/mL浓度范围内线性关系良好 (r=0.999 8)；平均回收率分别为：甲硫氨酸100.49%　(RSD为0.62%),维生素B1 99.95% (RSD为 0.48%）。结论 本法简便、快速、灵敏、准确，重现性好，可作为注射用甲硫氨酸维B1中甲硫氨酸和维生素B1的含量测定方法。 【关键词】; 高效液相色谱法；注射用甲硫氨酸维生素B1；甲硫氨酸；维生素B1 　　注射用甲硫氨酸维B1为甲硫氨酸和维生素B1的复合制剂。本品对于急慢性肝炎、肝硬化，尤其是对脂肪肝有特别的疗效；可用于肝内胆汁郁积以及乙醇、巴比妥类、磺胺类药物中毒时的辅助治疗；并可作为治疗神经炎和心肌炎的辅助药物。目前对其注射剂及冻干粉针剂的含量测定已有文献报道［1-3］。为有效控制产品质量，本文直接采用HPLC法测定其主要成分甲硫氨酸和维生素B1的含量，方法简便，结果准确。 　　1; 仪器与试药 　　日本岛津高效液相色谱仪(SPD10Avp检测器,LC10Atvp泵)，工作站：AnaStar色谱处理系统，色谱柱：Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。 　　甲硫氨酸对照品（批号为140684200401）、维生素B1对照品（批号为100390200502）由中国药品生物制品检定所提供；注射用甲硫氨酸维B1（本公司自制，批号为050318、050319、050320，规格：甲硫氨酸40 mg与维生素B1 4 mg）；乙腈为色谱纯，庚烷磺酸钠、磷酸钠、磷酸为分析纯。 　　2; 方法与结果 　　2.1; 色谱条件; 色谱柱: ODSC18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)；流速: 1.0 mL/min；检测波长：210 nm；流动相：以缓冲液［取庚烷磺酸钠0.25 g，用磷酸钠溶液（取磷酸钠38 g,加水至1 000 mL使溶解，用磷酸调pH值至2.1）溶解并稀释成1 000 mL］乙腈（体积比94∶6）；进样量：20 μL；测定方法：外标法，积分峰面积。 　　2.2; 对照品溶液的制备; 精密称定甲硫氨酸对照品50 mg和维生素B1对照品5 mg，置同一50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 　　2.3; 供试品溶液的制备; 取本品细粉适量(约相当于甲硫氨酸50 mg)，精密称定，置50 mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 　　2.4; 干扰试验; 分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、空白溶剂20 μL，注入液相色谱仪，结果空白溶剂无干扰峰，见图1。 　　2.5; 线性关系; 精密称定甲硫氨酸对照品约100 mg和维生素B1对照品约10 mg，置同一10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取上述溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置10 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取上述溶液各20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液质量浓度(ρ)为横坐标，测得峰面积值(A)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：甲硫氨酸A=5.597×106ρ+2.493×105,r=0.999 6;维生素B1 A=1.163×107ρ+2.147×104,r=0.999 8。　　 　　结果表明甲硫氨酸在0.60～1.40 mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系；维生素B1在006~0.14 mg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。 　　2.6; 精密度试验和稳定性试验 取同一份对照品溶液，分别重复进样6次，每次进样20 μL，结果甲硫氨酸和维生素B1 RSD分别为0.89%和1.13%。 ; 　　A.对照品; B.样品; C. 空白溶剂 1、维生素B1 2、甲硫氨酸 　 　 　　图1; HPLC色谱图（略） 　 　　Fig.1; HPLC chromatograms ;　　取同一份对照品溶液，在室温条件下放置6 h，分别在0、2、4、6 h测定1次，结果甲硫氨酸和维生素B1的RSD分别为0.89%和0.94%,表明本品溶液在6 h内稳定。 　　2.7