PPARγ2基因Pro12Ala多态性及肥胖相关性.docVIP

PPARγ2基因Pro12Ala多态性及肥胖相关性 　【摘要】 目的 探讨PPARγ2基因Pro12ALa多态性与肥胖相关性。方法将研究对象按体质量指数（BMI）分为肥胖组（n=62）和非肥胖组（n=121）。再将所有对象分为糖尿病组（DM组,n=79）、对照组（NC组,n=104）；DM组和NC组再分别根据BMI分为肥胖组与非肥胖组。应用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性方法检测PPARγ2基因Pro12Ala多态性。比较肥胖与非肥胖组、DM组中的肥胖与非肥胖人群、NC组中的肥胖与非肥胖人群基因型频率及等位基因频率。结果肥胖组和非肥胖组基因型频率和等位基因频率无显著性差异（Pgt;0.05）。进一步分组， DM组中肥胖组和非肥胖组基因型频率、等位基因频率之间无显著性差异（Pgt;0.05），NC组中肥胖组和非肥胖组基因型频率无显著性差异（Pgt;0.05），而等位基因频率有显著性差异（Plt;0.05）。结论PPARγ2基因Pro12Ala多态性与无T2DM家族史的正常人群肥胖有关，与糖尿病组中肥胖人群无关。 【关键词】 过氧化物酶体增殖物激活受 糖尿病 型 肥胖症 多态性 限制性片断长度 聚合酶链反应 肥胖和糖尿病有密切关系。调查发现，70%～80%的2型糖尿病(T2DM)患者同时是肥胖者，它们可能有共同的遗传因素。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferatoractivated receptor,PPAR) γ是由配体激活的核转录因子，属Ⅱ型核受体超家族成员，PPARγ2与脂肪细胞分化、肥胖、胰岛素抵抗关系密切而成为近年来研究的热点。PPARγ2基因外显子B的第12密码子的脯氨酸替换为丙氨酸，即Pro12Ala是PPARγ2最常见的多态位点。目前有关PPARγ2基因Pro12Ala多态性肥胖相关性国内外研究不一致[13]。笔者应用聚合酶链反应限制性内切酶片段长度多态性（PCRRFLP）方法，对西安地区肥胖与非肥胖组、糖尿病组中的肥胖与非肥胖人群、对照组中的肥胖与非肥胖人群PPARγ2基因Pro12Ala多态性研究，探讨PPARγ2基因Pro12Ala多态性与肥胖的相关性。 1对象与方法 1.1对象来源于2001年我院门诊、住院病人及健康查体者。首先将研究对象按体质量指数（BMI）分2组：（1）肥胖组（BMI≥25 kg/m2，n=62）。男性41例，女性21例，年龄（52.84±8.23）岁（43～74岁）。（2）非肥胖组（BMIlt;25 kg/m2，n=121）。男性70例，女性51例，年龄（53.47±7.54）岁（45～73岁）。再将研究对象按文献[4]标准分为2组：（1）糖尿病组（DM组，n=79），均为T2DM患者，且其家族中有血缘关系的T2DM患者≥2人，男性44例，女性3例，年龄（54.41±7.30）岁（46～74岁）；（2）对照组（NC组，n=104），均与T2DM无血缘关系，经口服糖耐量（OGTT）试验排除T2DM且符合糖耐量正常的诊断标准，男性67例，女性37例，年龄（53.90±8.41）岁（43～72岁）。然后再按BMI将DM 组分为肥胖组（n=29）与非肥胖组（n=50）；将NC组分为肥胖组（n=33）与非肥胖组（n=71）。 研究对象由医护人员在标准条件下按统一规范测量身高、体质量，并计算BMI。 1.2方法 1.2.1主要试剂全基因组DNA小量制备试剂盒（天为时代有限公司）；PCR引物和内切酶HpaⅡ（北京赛百盛基因技术有限公司）。 1.2.2基因组 DNA的提取每位对象空腹12～14 h后抽取静脉血1 mL，EDTA抗凝，按全基因组DNA小量制备试剂盒提取DNA，-20 ℃保存。 1.2.3PPAR基因PCR扩增 引物序列[5]： 上游：5′GCC AAT TCA AGC CCA GTC3′ 下游：5′GAT ATG TTT GCA GAC AGT GTA TCA GTG AAG GAA TCG CTT TCC G3′ PCR反应体系总体积13 μL。包括Mix 6 μL，上游引物2 μL，下游引物2 μL，蒸馏水2 μL，模板DNA 1 μL。反应条件：94 ℃ 5 min→94 ℃ 45 s→56 ℃ 45 s→72 ℃ 30 s，共30个循环，最后72 ℃延伸7 min。 1.2.4PPARγ2Pro/Ala基因型鉴定PCR产物用 HpaⅡ酶切。酶切体系为：总体积20 μL，包括10 μL PCR产物、0.5 μL HpaⅡ（5单位内切酶）、7.5 μL DDW、2 μl 10×缓冲液，37 ℃水浴箱中，消化约4 h；酶切产物用30 mg/L琼脂糖凝胶电泳（80 V，1 h）、265 nm的紫外灯下