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RAPD在绞股蓝种类鉴别应用上条件摸索 　 作者：罗育，李雄英，吴耀生，蒋军富，赵瑞强，曾麒燕 【摘要】 　　目的为采用随机扩增多态性技术鉴别绞股蓝及其易混品乌蔹莓，进行RAPD条件摸索。方法运用改进CTAB法提取七叶绞股蓝、五叶绞股蓝、乌蔹莓以及烟草基因组DNA，摸索影响RAPD的条件。结果用改进CTAB法提取所得的DNA质量较好，均能用于RAPD扩增，并摸索出了最优RAPD扩增条件。结论改进的CTAB法适合于这4种植物的DNA提取，摸索得到的RAPD扩增条件可用于绞股蓝种类鉴别及与其易混品乌蔹莓的区别。 【关键词】 绞股蓝 基因组DNA 随机扩增多态性DNA 鉴别 　　Abstract:ObjectiveTo explore the conditions of the differentiation of Gynostemma pentaphyllum from the mixed plant, Cayratia japonica with RAPD technology. MethodsThe improved CTAB method was used to extract the genome DNA from Jiao Gu Lan(Gynostemma pentaphyllum) Seven Leaves Jiao Gu Lan, Cayratia japonica and Tobacco, respectively. The optimum conditions of RAPD were researched. ResultsWith the improved CTAB method, the extracted DNA presented better quality and could be used to progress RAPD. The optimum conditions for RAPD have been successfully explored. Conclusion The improved CTAB method is suitable to extract genome DNA from the four medicinal plants, respectively, and the conditions explored with RAPD technology can be used to identify the variety of Gynostemma Pentaphyllum and distinguish it from the mixed plant, Cayratia japonica. 　　Key words:Gynostemma pentaphyllum; Genome DNA; RAPD; Identification 　　绞股蓝Gynostemma pentaphyllum，(Thunb) Makino系葫芦科绞股蓝属多年生攀缘草质藤本植物。绞股蓝具有较广泛的生态适应性，自然分布于秦岭及长江以南的15个省区。绞股蓝全草入药，有清热解毒、镇咳祛痰、抗癌、降血脂、防衰老、抗疲劳等功能，临床上应用于老年慢性支气管炎、哮喘、胃肠炎和传染性肝炎等疾病的治疗。从绞股蓝属植物中分离出的84种皂苷中有6种与人参皂苷的四环三萜达玛烷型结构完全相同，所以有“南方人参”的美誉。 　　RAPD（random amplified polymorphic DNA）技术是1990年由Williams和Welsh两个研究小组同时发展起来的一项DNA多态检测技术。RAPD具有不需要使用同位素、无需知道基因组DNA序列信息、操作过程简便、快速等优越性，它是众多分子标记中应用最广的一种［1，2］，在动植物的遗传多样性检测、品系鉴定、遗传图谱构建和系统学研究等领域已得到了广泛的应用［3，4］。 　　本实验通过摸索影响RAPD扩增的几个主要因素，找出最优扩增条件，试图在DNA水平上构建绞股蓝的分子标记，为绞股蓝种类鉴别及与其易混品乌蔹莓的区别提供理论依据，也为更好地利用绞股蓝这一药用植物提供帮助。 　　1 器材 　　1.1 材料 　　绞股蓝Gynostemma Pentaphyllum，(Thunb) Makino和乌蔹莓Cayratia japonica (Thunb) Gagn由广西药用植物园凌征柱教授提供；烟草（Tobacco）由中国科学院上海植物生理生态研究所提供。因绞股蓝掌状叶片常有五枚小叶，本文中称为五叶绞股蓝；另外，采集了另一种掌状叶片均为七枚小叶的绞股蓝，本文中称为七叶绞股蓝，其种类待鉴定。 　　1.2 仪器 　　电泳仪（DYY-10C型，北京六一仪器厂）；SmartspecTMpl