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Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白探究进展 　【关键词】 Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白 转录因子 真菌 　　锌指(zinc fingers)是指含有Zn2+的可与DNA相互作用的蛋白质基序(motif)，含有锌指基序的转录因子是一个大家族。目前已发现10多种不同种类的锌指基序，Zn(Ⅱ)2Cys6型锌指基序就是其中的一种，其组成是CysX2CysX6CysX5-12CysX2CysX6-8Cys，此基序中的半胱氨酸与2个锌离子结合。含有此基序的转录因子被称为Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白，仅存在于真菌中。1982年分离出的第一个Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白是Gal4p［1，2］，Gal4p是酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）半乳糖代谢相关基因的转录调节因子，在半乳糖存在下可以激活半乳糖代谢相关基因的转录。 　　 　　Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白可参与调节真菌的基础代谢、次级代谢、药物抗性及减数分裂等过程，其中对真菌次级代谢中相关的Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白的研究将有助于了解真菌的次级代谢的调控过程。 　　1 Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白的结构及其作用方式 　　 　　对已知的多种真菌的Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白的结构分析表明，从蛋白质的氨基端到羧基端分别由DNA结合域（DBD，DNAbinding domain）、调控域(regulatory domain)和酸性域(acidic region)组成。其中DBD又可分为锌指结构域(Zinc finger domain)、连接区域(linker region)以及二聚化区域(dimerization region)，在二聚化区域常含有螺旋的螺旋结构（Coiledcoil）。Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白可以单体、同源二聚体或异源二聚体的方式与DNA相互作用。个别锌簇蛋白的DBD结构域位于羧基端［3］。有时Zn2+可被其它金属离子所替代，如Cd2+可取代Gal4p中的Zn2+［4］。调控域与锌簇蛋白对靶基因的转录激活功能有关，如果缺失该区域，可能造成靶基因的表达被持续激活，即该区域可能是起到抑制转录激活的作用。羧基端的酸性域是转录激活域。 　　 　　Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白结合于目标基因的启动子区的DNA序列，所结合的DNA元件的保守序列是单个或重复的三核苷酸序列CGG［5］，结合的特异性与CGG三联体的方向、三联体之间的距离及CGG周围的碱基序列有关，常见的结合序列是CGGN6CCG 或CGGN11CCG。如转录因子Leu3p(参与亮氨酸代谢的调节)和Ppr1p（参与嘧啶代谢的调节）所辨认结合的2个CGG的间距分别为4 bp和6 bp［6］，按照CGG三联体的排列方向，这些DNA序列可被分为反向重复（inverted repeat）、翻转重复(everted repeat)和正向重复(direct repeat)3种类型，如图1所示（其中Hap1参与细胞色素C表达的调节）。二聚体Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白与DNA序列相互作用的方式如图2所示。Gal4p识别位点: CGGAAGACTCTCCTCCG Ppr1p识别位点: TCTTCGGCAATTGCCGAAGA 　　反向重复 GCCTTCTGAGAGGAGGC 反向重复 AGAAGCCGTTAACGGCTTCT 　　Leu3P识别位点： TGCCGGTACCGGCTTGG Hap1识别位点：GCCGGGGTTTACGGACGATGA 　　翻转重复 ACGGCCATGGCCGAACC 正向重复 CGGCCCCAAATGCCTGCTACT 　　图1 部分锌簇蛋白识别的DNA序列，图框中是CGG三联体［6］（略） 　　Figure 1 Zinc cluster proteins preferentially recognize CGG triplets 　　图2 锌簇蛋白与DNA序列的结合方式［5，6］（略） 　　Figure 2 Model for DNA binding of Zinc cluster proteins 　　矩形代表二聚体相互作用区域，箭头部分代表与DNA相互作用的区域，指明CGG的方向，矩形与箭头之间是连接区。 　　2 酿酒酵母中的Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白 　　酿酒酵母的全基因组测序表明其含有54个Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白。通过对其中33个Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白功能的分析发现，它们多参与氨基酸代谢、多药耐药性、减数分裂等过程的调节。 　　2.1 与多药耐药性相关的Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白 　　酵母中的Zn(Ⅱ)2Cys6锌簇蛋白主要通过激活与多药耐药性（PDR，pleiotropic drug resistance）相关的ABC转运蛋白（ATPbindi