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Survivin反义核酸诱导乳腺癌细胞凋亡实验探究 　 作者：段体德1，刘德权2，杨策尧1 【摘要】 目的 探讨Survivin反义核酸技术诱导乳腺癌细胞凋亡的作用及效果。方法 本实验共分6组，分为以脂质体介导反义寡核苷酸组（ASODN/Lip）、无义寡核苷酸组（NODN/Lip）及RPMI 1640培养液的空白对照组（Lip），转染人乳腺癌MCF-7细胞系，应用Hoechst 33258/PI双重染色观察MCF-7细胞的形态学改变，透射电镜观察细胞超微结构，流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化，DNA凝胶电泳观察凋亡情况，研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果 Hoechst 33258/PI染色及透射电镜观察可见转染后的细胞结构呈凋亡样改变；流式细胞仪检测见转染后细胞凋亡显著增加，并出现G2/M期阻滞现象；DNA凝胶电泳在600ng/ml，800ng/ml ASODN/Lip组的电泳图谱上呈现出明显的“梯状”现象。结论 凋亡抑制基因Survivin表达下调对乳腺癌细胞的生长抑制作用主要是通过诱导细胞发生凋亡以及阻止有丝分裂发生在G2/M阻滞期来实现，Survivin靶向反义核酸技术可能成为乳腺癌基因治疗的一种有效方法。 【关键词】 乳腺癌；Survivin基因；反义核酸技术；凋亡 【Abstract】 Objective To explore the effect of cells apoptosis on human breast cancer after survivin was blocked with the antisense technique.Methods The experiments were divided into six groups. Antisense Oligonucleotide (ASODN)， nonsense oligonucleotide (NODN) was transfected in human breast cancer MCF-7 cell line and RPMI 1640 culture medium (normal control). The study used Hoechst 33258/PI，electron microscope， flow cytometer and in gel electrophoresis of DNA to observe the cells apoptosis.Results The cells apoptosis after transfection were observed by Hoechst 33258/PI，electron microscope and in gel electrophoresis of DNA.The result of flow cytometer showed the cells apoptosis after transfection and the blocking phenomena appeared in G2/M period.Conclusion The restriction by the reduction of survivin expression in breast cancer cells is mainly functioned through its induction of cells apoptosis and prevention of mitosis at G2/M period. Survivin targeting therapy can be used as an important method in breast cancer treatment. 【Key words】 breast cancer；survivin gene；antisense technique；apoptosis 现代分子生物学研究发现与细胞恶性增殖和分化受阻一样，细胞凋亡异常在大多数恶性肿瘤的发病学上亦占有重要地位。诱导肿瘤细胞发生凋亡目前正逐步成为治疗恶性肿瘤的一种重要的治疗方法，具有较高的选择性与靶向性。Survivin是近年来发现的一个新的细胞凋亡抑制基因，能够抑制肿瘤细胞凋亡，使肿瘤细胞得以生存，在肿瘤细胞内导入凋亡活化基因或灭活凋亡抑制基因是肿瘤基因治疗的主要方法。在本实验研究中我们应用荧光染色、电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等技术，从细胞形态学到细胞周期、DNA变化，从定性到定量进行了研究。探讨是否可通过转染Survivin反义寡核苷酸（ASODN）诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡，为乳腺癌的基因