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PKD1，Polycystin及成人型多囊肾病 　关键字：多囊肾病 　　常染色体显性多囊肾病（autosomaldominantpolycystinkidneydiseaseADPKD）又称成人型多囊肾病，是最常见的肾脏遗传病，发病率在人群中可高达1‰[1]。其特征为渐进性的肾脏囊肿的形成与肾功能减弱，伴有广泛的肾外表现，大部分患者病情将发展至终末期肾衰[2～4]，因此能否在遗传物质水平进行干扰或治疗，或退而求其次，延缓病情发展，探讨其发病机理是颇具现实意义的。 　　作为单基因遗传病，ADPKD具有遗传异质性，按目前研究至少可由3个独立位点上的基因突变引起。PKD1定位于16p13.3[56]，占总患者数的85%[7]，临床表现也最典型；PKD2，位于4q13-23[89]，约占10%～15%，临床表现较轻[10]；第3个基因目前现仅有散见病例，尚未明确定位[1112]。本文拟就PKD1及其基因产物Polycystin的研究现状作一综述。 　　一、基因与蛋白结构 　　自1985年，Reeder通过RFLP连锁分析将PKD1定位于16p13.3，却由于该区域基因富集，表现为富含CpG岛(CpG为基因5＇端的标志)，定位克隆只能将范围缩小到600kb左右[13]。 　　之后近十年中，有关多囊肾的研究无突破性进展，直到1994年欧洲多囊肾协作组发现了一个特殊的葡萄牙患者家系[6]，家族中同时有结节性硬化患者与多囊肾患者，引起人们感兴趣的是结节性硬化也属遗传性疾病而且其基因TSC2定位正是上述基因富集区。经染色体检查等发现事实上在该病案中，16号染色体在16p13.3处断裂，其中ADPKD患者发生与22号染色体的平衡易位，而结节性硬化患者则发生了非平衡易位，有断裂片段的丢失，人们就推测后者由于片段丢失失去了TSC2基因，前者则由于平衡易位TSC2基因未遭破坏，只是易位断裂点正好破坏了PKD1。经分析证实断裂点确定破坏了一个基因，后来又在其它ADPKD患者发现有该基因的突变，进一步证实此为PKD1基因。 　　PKD1基因的结构具有其特殊性一除了3＇端大约20%的部分是单拷贝序列外，其余部分均在16p13.3至少有4个相同拷贝，从而为克隆该基因带来了困难。不过，世界各地的科学家不约而同绕开了这个问题[14～16]，如1995年国际多囊肾协作组通过比较cDNA与原始基因序列，成功组装了该mRNA。现已基本表明PKD1基因共跨越了52kb，包含46个外显子，转录成共14148bp的mRNA，开放讯码框12912bp，据此翻译合成的蛋白质分子，取名Polycystin国内也有称PKD1蛋白，含4304个氨基酸，分子量约462000道尔顿。 　　迄今为止，多囊肾患者PKD1基因突变的检出率仅10%～15%[17]，除了近来有报道在重复区域检出7种突变[18]，以往的记录则仅限于3＇端单拷贝区，共发现27种突变，类型计有缺失、移码、无义、错义等，也并未发现有所谓的脆性位点―只有一个位点的突变发现有超过1例，余均呈单发―如此提示我们，一则大部分突变主要位于上述重复区域内而目前尚难检测，突变可能遍及整个基因；二则Polycystin的多个结构部分均具有活性作用。 　　由于已明了Polycystin的氨基酸序列，人们对之进行了离体分析，发现Polycystin很大程度上是糖基化的，其C端组成亲水区域，近来有报道存在一个螺旋卷曲结构区域（coiled-coildomain）涉及与PKD2基因产物C端的特异性结合[19]（相互关系与作用此处不再赘述），不过假想中的跨膜结构各家尚有争论，Hughes等谓之为11跨膜单位[16]，美国多囊肾协作组则报道为7跨膜单位[14]，对于其组成的受体性质，也还尚无定论。而在Polycystin的N端，人们找到了与一些已知胞外蛋白具同源性的系列结构域，这些假想中的结构包括：①两个亮氨酸富集的重复区（LRRs）紧随在信号肽之后，它常涉及蛋白质之间的相互作用[14]；②随后的C-型植物凝集素域（Lectin），是结合碳水化合物的结构；③富含半胱氨酸的低密度脂蛋白A域（LDL-A），其功能是在LDL受体相关蛋白中充当配体粘着区；④还有多达14拷贝的免疫球蛋白样单位，以及多个Ⅲ型纤维连接蛋白。Polycystin整个大分子与已知所有的蛋白质家族均无同源性，仅由其结构探讨，推测Polycystin与细胞间及细胞―基质间的相互作用密切相关。 　　二、活体研究 　　1996年以来，由于各类抗Polycystin抗体的成功制备，使人们有机会进一步了解研究其功能[20～25]。 　　正常情况下，Polycystin广泛表达于多种器官的上皮细胞组成跨膜结构，包括肾脏（胎儿与成人）、肝内胆道、胰腺、肠道、肺脏、睾