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丁酸对树突状细胞免疫作用影响 　　短链脂肪酸是维持肠道正常生理功能和肠道免疫稳态的重要因素，以下是小编搜集整理的丁酸对树突状细胞免疫作用探究的论文范文，供大家阅读参考。 　　人及动物肠道内的短链脂肪酸(Short-chainfat-tyacids,SCFAs)是肠道内正常微生物群的代谢产物，是维持肠道正常生理功能和肠道免疫稳态的重要因素。丁酸盐作为肠道内最丰富的、具有生物活性的短链脂肪酸，不但是小肠上皮细胞的营养因子，维持上皮细胞的生长[1,2],而且还能够阻止结肠癌细胞的细胞周期循环和诱导结肠癌细胞凋亡[3]. 　　同时，作为一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂(Histonedeacetylaseinhibitor,HDACi),丁酸盐也具有潜在的免疫调节作用[4].在细胞内，组蛋白乙酰化受组蛋白乙酰转移酶(Histoneacetyltransferases,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(Histonedeacetylases,HDACs)调节。组蛋白乙酰化能够引起细胞核染色质扩张，并且增强调控蛋白与DNA的亲和力，而组蛋白去乙酰化则会引起核染色质缩合和转录阻遏[5].HDACi对肿瘤细胞的效应已有明确报道。HDACi可通过改变基因的转录阻止肿瘤细胞的生长、分化，从而诱导细胞凋亡[6].近期的研究报道也表明，HDACi有抗血管增生和免疫调节的作用，可使一些免疫性疾病和炎性疾病的体征得到改善，如可很大程度缓解系统性红斑狼疮(SLE)的蛋白尿、肾小球肾炎等[7]. 　　树突状细胞(DCs)是体内重要的抗原提呈细胞，在免疫系统中起重要的作用。鉴于DCs细胞表型与功能的可塑性，我们推测有去乙酰化酶抑制剂效应的代谢产物丁酸等短链脂肪酸可能具有调节DCs细胞特性的功能，并参与体内免疫稳态的维持。因此，本研究中以体外培养的骨髓源DCs细胞作为研究对象，探讨了丁酸对DCs细胞的免疫调节功能，并对其可能机制做了初步的探讨。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物6~12周龄的雌性C57/BL6小鼠(购自扬州大学比较医学中心),6~12周龄的H2kb-OVA257-264肽抗原特异性的OT1小鼠购自JacksonLab后，本室繁育后用于实验。 　　1.2主要试剂和仪器丁酸钠盐(Sigma公司),高糖DMEM培养基、胎牛血清(PAA公司),6孔板、24孔板、96孔板(Nunc公司),脂多糖(LPS,Sigma公司),卵清蛋白(OVA,Sigma公司),总RNA提取试剂Trizol(TaKaRa公司),逆转录试剂盒(Invitrogen公司),SYBRGreen荧光染料(TaKaRa公司),CFSE荧光染料(Invitrogen公司),RIPA裂解液(TaKaRa公司),CD11b-FITC、CD11c-Biotin-cy5.5、CD80-PE、CD86-PE、MHC-Ⅱ-FITC、B7-DC-FITC、TLR4-Biotin-cy5.5、CD8-Biotin-cy5.5、CD8-PE(eBioscience公司),磁分选试剂盒(Stemcell公司),7-AAD(eBio-science公司),p-erk和t-erk抗体(eBioscience公司),超净工作台(苏州净化厂),二氧化碳培养箱(Forma公司),倒置式生物显微镜(Nikon公司),PCR仪(Bio-Rad公司),台式离心机(Thermo公司),CFX96定量PCR仪(Bio-Rad公司),FACSCal-ibur流式细胞仪或BDAccuriC6流式细胞仪(BD公司). 　　1.3小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)的体外培养参照文献[8]进行。简述之，将C57/BL6小鼠处死后，取股骨与胫骨。用无菌PBS液冲洗骨髓腔，制备骨髓细胞。将骨髓细胞用含10%FCS、GM-CSF(10ng/ml)、IL-4(1ng/ml)的DMEM培养基在37℃、5%CO2条例下进行培养7d后，收获并纯化CD11c+细胞，作为不成熟BMDC细胞。将加入LPS(终浓度为1mu;g/ml)的细胞作为成熟BMDC细胞。 　　1.4丁酸对BMDCs膜表面共刺激分子和MHCⅡ的影响将诱导培养7d的BMDC细胞，按每孔5times;105细胞加入到24孔板中，分别加入LPS或丁酸盐(终浓度0.5mmol/L)后继续培养18h.收集细胞，用大鼠血清封闭10min后，4℃条件下，将细胞液中分别加入荧光素标记的CD80、CD86、MHCⅡ和B7-DC等抗体，标记15min.将标记完成的细胞用PBS液洗二遍后，用流式细胞分析仪检测标记细胞的荧光信号，并用Flowjo软件分析。 　　1.5丁酸对BMDCs分泌IL-6、IL-12和NO的影响细胞的处理与准备同1.4.细胞处理完成后，加入TRIZOL裂解BMDC细胞，提取其总RNA.按照逆转