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三氧化二砷对人胃癌裸鼠皮下移植瘤作用机制 　 作者：梁军，高永丽，赵园园，姚如永，尚庆军，高士芳，胡晓晓 【摘要】 目的： 探讨不同剂量As203对人胃癌细胞株SGC7901裸鼠皮下移植瘤的体内抑瘤作用及作用机制. 方法： 建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型，随机分为实验组即As203低（1.0 mg/kg）中（2.5 mg/kg）高（5.0 mg/kg）剂量组、空白对照生理盐水组及阳性对照5FU组（20 mg/kg），腹腔连续给药10 d，计算抑瘤率，检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规，观察用药前后裸鼠体重改变，实时定量RTPCR检测移植瘤内caspase3基因相对表达量. 结果： 低剂量As203组及5FU组抑瘤率分别为60.6%和78.2%，与生理盐水组比较有统计学差异（Plt;0.05）,中高剂量组及5FU组差异无统计学意义（Pgt;0.05）. 用药后低剂量As203组caspase3的基因表达显著增高，与生理盐水组比较有统计学意义（Plt;0.05）,中高剂量组在数值上caspase3表达增高，但无统计学差异（Pgt;0.05）. 各剂量组均出现白细胞抑制，但较5FU组轻，肝肾功能未见异常. 结论： 低剂量As203表现出抑制肿瘤生长的作用,其机制可能与上调caspase3基因的表达有关；As203对肝肾无明显毒性. 【关键词】 三氧化二砷；胃肿瘤；小鼠，祼；肿瘤移植；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 　0引言 　　 　　胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及癌症相关死亡率高［1］，现有化疗药物有效率低缓解期短，延长生存有限［2］，因此探索新的化疗药物具有重要的临床意义. 目前在细胞及小鼠体内水平的研究均发现As203能抑制体外培养胃癌细胞及小鼠胃癌的生长［3-5］，在此基础之上，本实验通过建立人胃癌裸鼠移植瘤模型在体内水平对As203的体内抗人胃癌作用进行疗效观察及机制研究，为As203用于临床治疗提供实验依据. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　1.1.1细胞株和实验动物人胃癌细胞株SCG7901,购自中国科学院上海生物研究所. Balb/cnu 裸小鼠，25只，4~6 wk龄，雄性，体质量18~22 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司(SLAC)，饲养于SPF(specific pathogen free condition)级动物实验室. 　　1.1.2药物及试剂As203注射液系哈尔滨伊达药业有限公司惠赠，5FU注射液购自天津金耀有限公司，多克隆活性Caspase3抗体购自BD公司，引物及荧光探针由上海生物公司合成，Trizol 试剂盒购自Invitrogen公司，realtime PCR 反应试剂盒购自日本TaKaRa公司. 　　1.2方法 　　1.2.1细胞培养和动物模型的建立胃癌细胞株SCG7901培养于含100 mL/L标准胎牛血清的RPMI1640培养液中，在37℃, 50 mL/L CO2的条件下培养，收集对数生长期的细胞制备成浓度为3×1010/L的单细胞悬液，在超净工作台内于裸鼠腹股沟区皮下注射0.15 mL的单细胞悬液，注射局部出现明显皮丘，7 d后所有裸鼠均出现直径大于5 mm的皮下结节，移植瘤模型建立. 　　1.2.2裸鼠分组和给药于接种后8 d将已建立皮下移植瘤模型的25只裸鼠随机分为5组，即生理盐水组（空白对照组）,5FU组（阳性对照组）、As203高中低剂量组（1.0,2.5及5.0 mg/kg）,每组5只. 并于当日将As203及5FU注射液稀释适当浓度腹腔给药，生理盐水组生理盐水0.4 mL,ip,连续给药10 d，给药期间每天观察各组裸鼠的精神、饮食、活动、大小便等一般情况于停药后第2日处死裸鼠，剥离瘤组织，称取瘤重并按下面公式计算抑瘤率： 瘤重抑瘤率=(1一实验组平均瘤重／对照组平均瘤重)×100％. 采用摘眼球取血方法采集血样以备血常规及生化检测. 肿瘤组织于-70℃冰箱保存. 　　1.2.3Realtime RTPCR按照Trizol说明书提取瘤组织中总RNA，分光光度计检测260/280吸光光度比值，选取比值在1.8~2.1之间的RNA样本. 采用TaKaRa的反转录反应体系进行反转录反应以合成cDNA，以管家基因GDPH为对照，采用Taq探针法应用Light Cycler Real Time PCR(Roche Diagnostics公司)扩增仪进行PCR反应，用20 μL TaKaRa PCR反应体系，反应条件为95℃ 5 s变性，60℃ 30 s退火及延伸， 40个循环. 用Roche LightCycler probe design software 2.0软件设计引物及探针，caspase3 前后引物序列分别为５′