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不同DNA干系倍体鼻咽癌细胞增殖活性探究 　 作者：王凤岩，夏潮涌，黄中新，唐海兰，覃 莉，饶晓黎 【摘要】 目的 研究不同DNA干系倍体鼻咽癌细胞核的增殖活性。方法 鼻咽癌归档病例37例，要求每个病例包括正常鼻咽上皮组织和三个癌巢或肿瘤组织区域，免疫组化SP法进行PCNA与Ki-67染色，TIGER细胞图像分析仪分别检测每个癌巢或肿瘤区域的PCNA、Ki-67阳性表达率与DNA干系倍体。结果 同一癌巢或肿瘤区域的DNA干系二倍体的PCNA与Ki-67阳性表达率与DNA干系异倍体相比差异无显著性（P＞0.05）。结论 不同DNA干系倍体鼻咽癌的细胞增殖活性相同。 【关键词】 DNA干系倍体；细胞增殖；鼻咽癌；PCNA；Ki-67 Study the proliferation of DNA diploidy and DNA abnormal ploidy in nasopharyngeal cancer cells 【Abstract】 Objective To study the proliferation DNA ploidy in nasopharyngeal cellular nucleus.Methods 37 archival cases of nasopharyngeal carcinoma(NPC) were taken，each case contained the normal tissue and 3 cancer nests or region (in total 111 samples).The expression of PCNA and Ki-67 were examined by immunohistochemical SP method，DNA stem ploidy and the percent of PCNA，ki-67 positive cell nuclei were obtained by TIGER cell imagine analyzer.Results Compared with diploidy，the expression of PCNA and Ki-67 in abnormal ploidy were no statistical significance difference in the same net or carcinoma region (P＞0.05).Conclusion The prolifertion of DNA diploidy and DNA abnormal ploidy is equally in nasopharyngeal. 【Key words】 DNA stem ploidy； cell proliferation； nasopharyngeal carcinoma；PCNA； Ki-67 肿瘤细胞DNA含量及其干系倍体与肿瘤复发、转移及预后密切相关，研究表明DNA干系异倍体肿瘤的细胞增殖活性明显高于DNA干系二倍体的［1～3］。鼻咽癌是我国南部省区特异高发的一种恶性肿瘤，在国外比较罕见，有关鼻咽癌DNA干系倍体细胞的增殖活性鲜见报道，本文通过TIGER细胞图像分析仪，对37例鼻咽癌病例的DNA含量与干系倍体状况进行了分析，以PCNA 、Ki-67的阳性表达率反映细胞增殖情况，研究不同DNA干系倍体鼻咽癌细胞的增殖活性。 1 材料与方法 1.1 病例来源与组织切片的制备 暨南大学医学院附属第一医院1980～2000年鼻咽癌活检归档蜡块，术前均未进行放化疗，选择每个病例包括正常鼻咽上皮组织和三个癌巢或肿瘤区域，共37例，其中男29例，女8例，平均年龄49.1岁（18～82岁）。其中低分化鳞癌23例，泡状核细胞癌7例，未分化癌7例。每个病例制成4μm、8μm连续组织切片。 1.2 免疫组化染色及阳性表达率的计算 PCNA与Ki-67单克隆抗原均购自美国 DAKO公司，其余试剂均购自北京中山生物技术有限公司。4μm组织切片采用SP法，微波修复，DAB显色，苏木素复染。以PBS代替一抗作为阴性对照；以淋巴结作为PCNA的阳性对照；以人乳腺癌作为Ki-67的阳性对照。使用TIGER细胞图像分析仪分别计数每个癌巢或肿瘤区域的阳性细胞核数与阴性细胞核数，计算每个癌巢或肿瘤区域的PCNA与Ki-67阳性表达百分率。 1.3 鼻咽癌细胞核DNA染色及其干系倍体的定量分析 1.3.1 Feulgen染色 4μm、8μm连续组织切片各1张，二甲苯脱蜡15＇×3.5 M HCl室温水解1h，Schiffs试剂室温染色1h。 1.3.2 细胞图像分析仪的校正 使用显微测微尺标定TIGER细胞